Periferik Kan Alma ve Plazma İzolasyonu için Bir Fare Kuyruğu Snip Prosedürü
JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 2:51 dk • July 8th, 2025
Kuyruğuna erişim sağlamak için bir fareyi dezenfekte edilmiş bir odaya yerleştirin.
Fare hareketini en aza indirmek için hazneyi sabitleyin.
Kuyruğu sterilize edin ve uyuşturun.
Keskin bir cerrahi makas kullanarak, bir kan damarı ağı içeren farenin kuyruğunun ucundan küçük bir kısmı kesin.
Bu kuyruk kesme prosedürü, küçük bir hacimde periferik kanın toplanmasını sağlar.
Tüpün kılcal hareketini kullanarak kanı heparinize bir kılcal tüpe toplayın. Heparinize tüp, kan pıhtılaşmasını önlemeye yardımcı olur.
Bir ampul şırıngası kullanarak, kanı EDTA kaplı bir tüpe aktarın.
Kanın bir antikoagülan olan EDTA ile düzgün bir şekilde karıştırılması için tüpü ters çevirin. EDTA, kandaki kalsiyum iyonlarını bağlayarak pıhtılaşmayı önler.
Plazmayı kan hücrelerinden ayırmak için tüpü santrifüjleyin.
Plazma içeren üst tabakayı toplayın ve yeni bir tüpe aktarın.
Plazma bileşenlerinin bütünlüğünü korumak için tüpü daha düşük sıcaklıklarda saklayın.
Periferik bir kan örneği almak için, önce fareyi dezenfekte edilmiş küçük bir hayvan tutucusuna nazikçe yerleştirin ve hayvanın hareketlerini en aza indirmek için tüpü sabitleyin.
Daha sonra kuyruğu taze izopropil alkolle ovalayın, ardından topikal anestezik krem uygulayın.
Çok keskin cerrahi makas kullanarak, kuyruğun ucundan yaklaşık 0,5 ila 1 milimetre kesin ve yaklaşık 80 mikrolitre periferik kanı heparinize kılcal tüplere toplayın.
Kan örneklerini etiketli potasyum-EDTA mikrotainer tüpüne aktarmak için bir ampul şırıngası kullanın ve pıhtılaşmayı önlemek için tüpü 20 kez ters çevirin.
Üreticinin talimatlarına göre kan alma tüplerini santrifüjledikten sonra, plazma tabakasını dikkatlice toplayın ve alikotları eksi 20 santigrat derecede saklayın ve plazmayı eksi 20 santigrat derece saklama için ayırın.
Genel Bakış
Bu makale, farelerden kuyruk ucu kesme işlemi yoluyla periferik kan örnekleri toplama yöntemini ayrıntılandırmaktadır. Bu işlem, daha sonraki analizler için kan toplanmasına imkan tanırken hayvanın minimum düzeyde rahatsız olmasını sağlar.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Sinirbilim
- Hayvan fizyolojisi
- Kan örneği toplama teknikleri
Arka Plan
- Çeşitli biyolojik analizler için periferik kan örneklemesi kritik öneme sahiptir.
- Prosedürler sırasında hayvan stresini minimize etmek, etik araştırma için esastır.
- Kan örneklerinin düzgün şekilde taşınması ve saklanması, örnek bütünlüğünün korunması için hayati önem taşır.
- Kan toplama işlemlerinde anticoagulant olarak yaygın şekilde EDTA kullanılır.
Çalışmanın Amacı
- Farelerden periferik kan toplama için standartlaştırılmış bir yöntemi ana hatlarıyla belirtmek.
- Prosedürün hem hayvan hem de araştırmacı için güvenli ve etkili olmasını sağlamak.
- Kan örneklerinin uygun şekilde taşınması ve saklanması için kılavuzlar sağlamak.
Kullanılan Yöntemler
- Fareyi dezenfekte edilmiş bir hazneye yerleştirme.
- Kuyruğu kesip kan toplamak için cerrahi makas kullanma.
- Kan toplama için heparinli kapiler tüplerden yararlanma.
- Plazmayı kan hücrelerinden ayırmak için örnekleri santrifüjleme.
Temel Sonuçlar
- Yaklaşık 80 µL kanın başarıyla toplanması.
- EDTA kullanılarak koagülasyonun etkili bir şekilde önlenmesi.
- Plazma örneklerinin bütünlüğü için -20 °C'de saklanması.
- Prosedürün hayvana minimum düzeyde stres verdiğinin gösterilmesi.
Sonuçlar
- Kuyruk ucunu kesme yöntemi, farelerden kan toplamak için güvenilir bir tekniktir.
- Numune kalitesi için uygun sterilizasyon ve uygulama kritik öneme sahiptir.
- Bu yöntem, nörobilim araştırmalarındaki çeşitli deneysel ihtiyaçlara göre uyarlanabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Endüstriyel Uygulama Uygunluğu
Fare modellerinden periferik kan toplanması, preklinik çalışmalarda farmakokinetik ve farmakodinamik profillemeye olanak tanır. Güvenilir plazma izolasyonu, biyobelirteç keşfini ve hedef etkileşim analizlerini destekler. Bu yöntem, ilaç keşif iş akışlarındaki seri örnekleme için standartlaştırılmış ve düşük stresli bir yaklaşım sunar.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: İn vivo hedef modülasyonunu doğrulamak için dolaşımdaki biyobelirteçlerin ölçülmesini sağlar.
- Operasyonel Değer: ELISA, LC-MS veya multipleks immünolojik analizler için tekrarlanabilir plazma örnekleri sağlar.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Bilimsel Değer: Otantik fare plazma matrisleri kullanarak analiz geliştirme süreçlerini destekler.
- Operasyonel Değer: Yüksek çıktılı tarama doğrulaması için tutarlı örnek kalitesi sağlar.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Bilimsel Değer: İlaç maruziyetinin ve yanıtının boylamsal izlenmesini kolaylaştırır.
- Operasyonel Değer: Standartlaştırılmış toplama ve saklama yoluyla çalışmalar arası karşılaştırılabilirliğe olanak tanır.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu yöntem, in vivo dozlamadan biyanalitik analize kadar uzanan keşif sürekliliğine uyum sağlayarak, öncü bileşik optimizasyonunu ve preklinik güvenlik değerlendirmesini desteklemektedir.
- Keşif Biyolojisi: Hedef etkileşiminin fenotipik sonuçlarla korelasyonuna olanak tanır.
- Tarama: Karşı tarama ve seçicilik profilleme için plazma sağlar.
- Analitik: Kantitatif biyoanaliz için analit-stabil örnekler sunar.
- Translasyonel Araştırma: Hastalıkla ilgili modellerde biyobelirteç kalifikasyonunu destekler.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Projeler genelinde fare kanı toplama işlemi için yeniden kullanılabilir bir SOP oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Standartlaştırılmış teknik sayesinde farmakokinetik verilerdeki değişkenliği azaltır.
- Operasyonel Değer: Verimli mikro-örnekleme (80 µL) yoluyla hayvan kullanımını minimize eder.
- Stratejik Değer: Güvenilir maruziyet verileri ile karar verme süreçlerini (devam/dur kararları) hızlandırır.
- Portföy Etkisi: Kaliteli plazma örnekleri aracılığıyla klinik translasyon öngörüsünü geliştirir.
Uygulama Hususları
- Aseptik teknik ve hayvan kullanımı konusunda eğitim.
- Santrifüj, microtainer tüpleri ve soğuk depolama alanına erişim.
- Operatörler ve tesisler arasında standardizasyon.
- Farklı fare suşlarına veya yaşlarına adaptasyon.
- Sınırlama: Örnek hacmi, multipleks analiz panellerini kısıtlayabilir.
Biyofarma SSS
Rat Yanal Kuyruk Ven gelen Kan Örnekleme
İlgili videolar
0 Görüntüler
Pulsatil luteinizan hormon salgısı değerlendirilmesi için kuyruk ucu kan örnekleme farelerde sık
İlgili videolar
0 Görüntüler
Tam Anestezi Uygulanan Hemofili A Farelerinde Kuyruk Ven Transeksiyonu Kanama Modeli
İlgili videolar
0 Görüntüler
Fare Tails Genomik DNA izolasyonu
İlgili videolar
0 Görüntüler
Kuyruk damar anestezi sıçan bir vakum kan toplama sistemi ile kan koleksiyonundan tekrarlanan
İlgili videolar
0 Görüntüler
Kuyruk damarlar bir vakum kan toplama sistemi ve gözlük büyüteç ile sigara anestezi farelerin koleksiyonundan değiştirilmiş kan
İlgili videolar
0 Görüntüler
Farelerde subclavian ven delinme yoluyla kan toplama
İlgili videolar
0 Görüntüler
Fare kan trombosit arıtma
İlgili videolar
0 Görüntüler
Bir Murine Kuyruk Lenfödem Modeli
İlgili videolar
0 Görüntüler
EEG Kayıtları Sırasında Sıçanlarda Lateral Kuyruk Veninden Beyin Omurilik Sıvısı ve Kan Örneği Alınması
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 22 Ağustos 2026