Mesane Biyopsi Kesitlerinde Bakterilerin Floresan In Situ Hibridizasyon ile Görüntülenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 6:10 dk. • July 8th, 2025
Üropatojenik bakteri içeren deparafininize edilmiş ve rehidre edilmiş enfekte idrar kesesi biyopsi doku kesiti taşıyan bir cam slayt ile başlayın.
Floresan etiketli evrensel probları tanıtın - bakteriyel 16s ribozomal RNA veya 16s-rRNA'nın korunmuş bölgesine özgü tamamlayıcı bir tek sarmallı oligonükleotid.
Optimum hibridizasyon için slaydı karanlıkta yüksek bir sıcaklıkta inkübe edin.
İnkübasyon sırasında, problar yalnızca bakteriyel 16s-rRNA üzerindeki korunan bölgeye hibridize olur ve bakterilere yeşil floresan verir.
Hibridizasyon sonrası, bağlanmamış probları çıkarmak için önceden ısıtılmış bir tamponla yıkayın.
Doku bölümünü Hoechst boyası ve florofor etiketli hücresel protein belirteçleri ile boyayın.
Hoechst molekülleri DNA'ya bağlanarak çekirdekleri maviye boyarken, florofor etiketli belirteçler müsin ve aktin filamentleri gibi spesifik hücre bileşenleri ile etkileşime girerek biyopsi bölümünde kırmızı floresan verir.
Slaytı yıkayın ve kağıt mendil bölümüne montaj ortamı ekleyin.
Konfokal mikroskop altında, kırmızı floresan taşıyan mesane biyopsi bölümündeki yeşil floresan, doku ile ilişkili bakterileri doğrular.
Bir P1000 uç kutusunun haznesine ıslatılmış, buruşuk, hassas
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin