JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:54 dk. • July 8th, 2025
Jurkat hücrelerinin bir süspansiyonunu alın - T lenfosit lösemi hücreleri.
Bir alikotu bir hücre canlılığı boyası ile karıştırın ve yeterli sayıda canlı hücre olduğundan emin olun.
Hücreleri bir kültür kabına koyun ve gereken süre boyunca ultraviyole C veya UVC radyasyonu uygulayın.
UVC hücrelere nüfuz eder ve DNA tarafından emilerek pirimidin fotoürünleri oluşturur.
Işınlama sonrası, hücreleri inkübe edin. Geniş UVC aracılı DNA hasarı, dış mitokondriyal membran üzerindeki pro-apoptotik proteinleri aktive ederek içsel apoptoz yolunu başlatır.
Aktive edilmiş proteinler oligomerleşir, zar gözenekleri oluşturur ve zarlar arası boşluktan sitoplazmaya sitokrom C salgılar.
Sitokrom C, apoptotik proteaz aktive edici faktör-1 ile kompleks oluşturarak bir apoptozom kompleksi oluşturur. Apoptozom, kaspazları aktive ederek apoptoza neden olur.
Bir apoptotik hücre markörü olan zar üzerindeki fosfatidilserini etiketlemek için florofor etiketli ek V ekleyin ve DNA'yı etiketlemek için hasarlı zardan giren propidyum iyodür ekleyin.
Akış sitometrisi kullanarak, annexin V işaretli erken apoptotik hücreleri ve çift lekeli geç apoptotik hücreleri belirleyin.
Jurkat T hücrelerini, el yazması talimatlar
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin