Flow Sitometri Kullanarak Bir Test Alerjeni Varlığında Bazofil Aktivasyonunun Analiz Edilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 5:37 dk. • July 8th, 2025
Bir stimülasyon tamponunda süspanse edilmiş floresan etiketli monoklonal antikorları içeren bir boyama karışımı içeren sitometre tüplerini alın.
Test alerjeninin azalan konsantrasyonlarını birkaç tüpe ekleyin. IgE aracılı pozitif kontrol olarak hizmet etmek için bir tüpe anti-IgE antikorları ekleyin ve negatif kontrol için başka bir tüpe tampon ekleyin.
İnsan periferik kanını tüplere pipetleyin. Kuluçkaya yatmak.
Birey test alerjenine duyarlı hale gelirse, bu maruziyet alerjenin bazofil yüzeyindeki Fc reseptörlerine bağlı alerjene özgü IgE antikorlarına bağlanmasına neden olur.
Alerjenler, IgE'ye bağlı Fc reseptörlerini çapraz bağlayarak bazofil aktivasyonuna neden olur.
Bazofiller, CD63 ve CD203c moleküllerinin yukarı regülasyonu ile enflamatuar mediatörler içeren hücre içi granülleri serbest bırakarak degranülasyona uğrarlar.
Floresan etiketli monoklonal antikorlar, bazofiller üzerinde sırasıyla CD63, CD203c ve CCR3'e bağlanır.
Bazofil degranülasyonunu durdurmak için sıcaklığı düşürün.
Eritrositleri parçalamak için tampon ekleyin ve hücreleri sabitleyin.
Bir akış sitometresi kullanarak, lenfosit popülasyonundan bazofilleri tanımlayın.
CD63'ü bir aktivasyon belirteci olarak kullan
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin