JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:43 dk. • July 8th, 2025
Yeni çekilmiş insan kanı içeren bir tüp alın ve bir lizis tamponu ekleyin.
Tampondaki deterjan hücre zarına nüfuz eder, hücreleri parçalar ve hücre içi nükleik asitleri veya NA'ları ve nükleazları serbest bırakır.
Tampondaki kaotropik ajanlar nükleazları denatüre ederek NA bozulmasını önler.
Manyetik cam parçacıkları veya MGP'ler - silika kaplı manyetik parçacıklar - ekleyin ve iyice karıştırın.
Tamponun düşük pH'ı silikayı protonlayarak MGP'lerin yüzeyinde pozitif bir yük oluşturur.
Negatif yüklü NA'lar, yüklü yüzeye elektrostatik olarak bağlanarak bir NA-MGP kompleksi oluşturur.
Manyetik bir alan altında, NA-MGP kompleksleri tüpün yanında toplanır.
Hücre kalıntıları ve proteinler içeren süpernatanı atın.
NA-MGP komplekslerini bir yıkama tamponunda yeniden süspanse ederek, kompleksleri toplamak için bir manyetik alan uygulayarak ve süpernatanı kalan kirleticilerle birlikte atarak birden fazla yıkama adımı gerçekleştirin.
Kompleksleri bir elüsyon tamponunda yeniden süspanse edin. Yüksek pH, NA-MGP etkileşimini bozarak NA'ları serbest bırakır. Ayrıştırılan NA'lar, aşağı akış tahlilleri için hazırdır.
Toplanan kandan nükleik asitleri saflaştırmak için, vakum tüpünü elle 5 ila 10 kez
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin