JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 2:40 dk • July 8th, 2025
Doğal öldürücü veya NK hücreleri ve floresan lekeli hedef hücreler içeren bir hücre peleti ile başlayın.
Peleti uygun bir ortamda tekrar süspanse edin ve inkübe edin.
NK hücresi, yüzey yapışma proteinleri aracılığıyla etkileşime girerek hedef hücre ile immünolojik bir sinaps oluşturur.
Bu, sinaps içine perforin ve granzimler içeren sitotoksik granülleri serbest bırakarak NK hücresi sinyallemesini başlatır.
Gözenek oluşturan bir protein olan perforin, hedef hücrenin zarında kanallar oluşturarak granzimlerin sitoplazmaya girmesine izin verir.
Bir serin proteaz olan granzim, hücre içi proteinlerle etkileşime girerek hedef hücredeki apoptotik yolu aktive eder.
Şimdi, propidyum iyodür floresan boya ekleyin.
Boya, ölü hücrelere hasarlı zarlarından girer ve baz çiftleri arasında ara araya girerek DNA'ya bağlanır.
Sonuç olarak, ölü hücreler çift florokrom eksprese ederken, canlı hücreler tek florokrom eksprese eder.
Numune, ölü ve canlı hedef hücre sayılarını ölçerek NK hücresinin neden olduğu sitotoksisiteyi değerlendirmek için akış sitometrisi için hazırdır.
Bir sitotoksisite tahlil numunesi hazırlamak için, önce her numune ve / veya katılımcı için uygun şekilde 1,5 mililitrelik tüpleri etiketleyin ve istenen oranda NK hücreleri ve DiO etiketli K562 hücrelerini her tüpe pipetleyin.
Hücreleri santrifüjleme ile toplayın ve hücre peletini bozmadan süpernatanı dikkatlice çıkarın. Daha sonra, hücre karışımını 500 mikrolitre eksik NK hücre ortamında yeniden süspanse edin ve her tüpteki hücreleri 5 mikrolitre propidyum iyodür ile etiketleyin.
Hücreleri başka bir santrifüjleme yoluyla toplayın ve soğuk kültürü iki saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. İnkübasyonun sonunda, hücreleri aynı santrifüj koşulları altında santrifüjleyin ve peleti 25 mikrolitre taze ve eksiksiz NK hücre kültürü ortamında yeniden süspanse edin.
Bu makale, akış sitometrisi kullanarak doğal katil (NK) hücrelerinin indüklediği sitotoksisitenin değerlendirilmesine yönelik bir yöntemi açıklamaktadır. İşlem, NK hücrelerinin hedef hücrelerle etkileşime girmesini, bunun sonucunda sitotoksik granüllerin salınmasını ve ardından hücre ölümünün gerçekleşmesini içerir.
Doğal öldürücü (NK) hücre aracılı sitotoksisitenin kantitatif değerlendirmesi, immüno-onkoloji keşifleri ve immün efektör fonksiyonunun mekanistik risk azaltma süreçleri için kritik öneme sahiptir. NK hücre litik aktivitesinin akım sitometrik analizi, yüksek güvenilirlikli hedef doğrulamasına olanak tanır ve erken aşama süreçlerde immün hücre potansiyelinin öngörülü değerlendirmesini destekler. Bu analiz yöntemi, ekiplerin immün-modüle edici adayları sağlam ve tekrarlanabilir sitotoksisite verileriyle önceliklendirmesini sağlar.
Bu NK hücresi sitotoksisite testi, hem erken hedef doğrulamayı hem de sonraki fonksiyonel taramaları destekleyerek, keşiften preklinik aşamaya kadar olan sürekliliğe entegre olur.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 22 Ağustos 2026