Laktat Dehidrojenaz Testi ile Akciğer Dilimlerinde Sitotoksisite ve Membran Bütünlüğünün Değerlendirilmesi

Çok kuyulu bir plakada yüzey aktif madde molekülleri gibi sitotoksik ajanlarla muamele edilmiş, insan hassas kesilmiş akciğer dilimleri, PCLS ile başlayın.

Yüzey aktif madde, hücrenin lipid çift tabakasına girer ve yüzey aktif maddenin hidrofobik kuyruklarının lipid çift tabakasının hidrofobik çekirdeği ile etkileşime girmesine neden olur.

Sonuç olarak, lipit moleküllerinin düzenli düzenlenmesi bozulur ve bu da bir misel oluşumuna yol açar.

Bu, zar bütünlüğünü tehlikeye atarak, hücre zarı hasarının yaygın bir göstergesi olan laktat dehidrojenaz veya LDH dahil olmak üzere hücre içi içeriğin sızmasına neden olur.

Serbest bırakılan LDH'yi içeren süpernatanı toplayın.

Laktat substratı, NAD +, terforaz ve tetrazolyum tuzu içeren LDH tahlil reaksiyon kokteylini ekleyin ve inkübe edin.

LDH, aynı anda NAD + koenziminin NADH'ye indirgenmesiyle laktatı piruvata oksitler.

Diaphorase, tetrazolium tuzunu renkli bir ürün olan formazana indirgemek için NADH'yi kullanır.

Yüzey aktif maddenin neden olduğu sitotoksisite, formazan üretimi ile gösterilen LDH aktivitesinden ölçülebilir.

PCLS'yi test ajanları ile veya test ajanları olmadan inkübe ettikten sonra, 50 mikrolitre süpernatan ve kopyaları yen