$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Harici manyetik alanlara duyarlı bir paramanyetik gadolinyum çözeltisi alın.
Floresan etiketli Rhesus veya Rh faktörü pozitif ve etiketlenmemiş Rh faktörü negatif kan örneklerini tanıtın.
Anti-RhD antikor kaplı düşük yoğunluklu polimer boncuklar ve kaplanmamış yüksek yoğunluklu boncuklar ekleyin.
Anti-RhD antikorları, Rh-pozitif RBC'ler üzerindeki RhD antijenlerine bağlanarak boncuk-RBC kompleksleri oluşturur.
Şimdi, numuneyi bir kılcal tüpe yükleyin ve kapatın. Tüpü manyetik kaldırma cihazındaki mıknatısların arasına yerleştirin.
Benzer kutuplara bakan mıknatıslar tarafından oluşturulan manyetik alanda, paramanyetik çözelti, numune bileşenlerine manyetik ve kaldırma kuvveti uygulayarak, yoğunluklarıyla orantılı yüksekliklerde havaya kalkmalarına neden olur.
Düşük yoğunluklu ve yüksek yoğunluklu boncuklar, sırasıyla kılcal damarın üstünde ve altında havaya yükselir ve yoğunluk yüksekliği referansları oluşturur.
Diyamanyetik olan kan hücreleri, mıknatısların yakınındaki güçlü bir manyetik alan tarafından itilir ve ara bir pozisyonda havaya kalkar.
Boncuk-RBC kompleksleri, düşük yoğunluklu boncuklar ve RBC'ler arasında havaya yükselir ve bu katmandaki floresan hücreler Rh-pozitif RBC varlığını doğrular.
Başlamak için, Rhesus faktörü pozitif kan bağışçısının parmağını delmek için tek tıklamalı lanset cihazını kullanın ve 1 mililitre DPBS'de 10 mikrolitre kan toplayın. Plazma zarını floresan olarak boyamak için Rhesus faktörü pozitif hücrelerin 1 mililitre süspansiyonuna 1 mikrolitre floresan boya ekleyin ve 15 dakika boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Hücreleri 15 saniye boyunca 5.600 kez g'de döndürerek pelet yapın ve peleti 1 mililitre DPBS kullanarak üç kez yıkayın. Peletleri 1 mililitre HBSS'de kalsiyum ve magnezyum ile tekrar süspanse edin. Rhesus faktörü negatif kan bağışçısının parmağını delmek için tek tıklamalı delme cihazını kullanın ve iki mikrolitre kan toplayın.
Sadece boncuk içeren deney tüpünü hazırlamak için, kalsiyum ve magnezyum içeren 174 mikrolitre HBSS, 1 mikrolitre IgG kontrol boncuğu, mililitre başına 1.2 gram yoğunluğa sahip 1 mikrolitre ağır boncuk ve 24 mikrolitre 500 milimolar gadolinyum ekleyin.
IgG içeren deneysel kontrol tüpünü hazırlamak için, kalsiyum ve magnezyum içeren 172 mikrolitre HBSS, 1 mikrolitre IgG kontrol boncuğu, 1 mikrolitre ağır boncuk, 1 mikrolitre Rhesus faktörü negatif kan, 1 mikrolitre lekeli rhesus faktörü pozitif kan süspansiyonu ve 24 mikrolitre 500 milimolar gadolinyum ekleyin.
Örnek deney tüpünü hazırlamak için, kalsiyum ve magnezyum içeren 172 mikrolitre HBSS, 1 mikrolitre anti-RhD kaplı boncuk, 1 mikrolitre ağır boncuk, 1 mikrolitre rhesus faktörü negatif kan, 1 mikrolitre lekeli rhesus faktörü pozitif kan süspansiyonu ve 24 mikrolitre 500 milimolar gadolinyum ekleyin. Manyetik kaldırma cihazını kurun ve 50 mikrolitre numuneyi tüp dolana kadar bir kılcal tüpe yükleyin.
Kılcal borunun uçlarını bir kılcal dolgu macunu ile kapatın ve kabarcık olmadığından emin olun. Kılcal boruyu üst ve alt mıknatıslar arasındaki kılcal tutucuya yerleştirin. Sahneyi ayarlayın ve en iyi görüntüleme için odaklanın. Hücrelerin ve boncukların manyetik denge konumlarına yerleşmesi için yaklaşık 5 ila 20 dakika bekleyin.