JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 2:40 dk • July 8th, 2025
Olgunlaşmamış dendritik hücrelere veya DC'lere immünomodülatör bir farmakolojik ajan ekleyerek başlayın.
DC'ler, immün yanıtlar sırasında T hücresi proliferasyonunu teşvik etmek için çok önemli olan majör histouyumluluk kompleksini veya MHC sınıf-II molekülünü ve ko-stimülatör molekülleri eksprese eder.
İmmünomodülatör ajan DC ile etkileşime girer ve MHC sınıf-II ve ko-stimülatör moleküllerin ekspresyonunun aşağı regülasyonunu tetikler, böylece DC'yi tolerojenik bir dendritik hücreye veya TolDC'ye dönüştürür.
TolDC'leri saf CD4 + T hücreleri ile birlikte kültürleyin.
Ko-kültüre antijenik bir peptit ekleyin.
TolDC'ler peptidi içselleştirir, daha sonra elde edilen antijeni işler ve MHC molekülüne yükler.
Antijene bağlı MHC molekülü, hücre zarına yer değiştirir.
Naif CD4+ T hücreleri, TolDC'ler üzerindeki antijen-MHC kompleksi ile doğrudan etkileşime girer.
Olgun DC üzerindeki ko-stimülatör molekül ile etkileşim, saf T hücresinin tam aktivasyonunu sağlar.
Ko-stimülasyon olmadan, naif CD4 + T hücresi uykuda kalır ve sunulan antijene karşı bir bağışıklık tepkisi başlatamaz.
Hücreleri mililitre konsantrasyonda 2 x 105 dendritik hücrede yeniden süspanse edin ve 37 santigrat derecede 1 saat boyunca ilgilenilen triterpenoidin uygun deneysel konsantrasyonu ile tedavi edin.
İnkübasyonun son üçte biri sırasında, T hücrelerini mililitre konsantrasyonunda 1 x 107 hücrede ve 37 santigrat derecede 15 dakika boyunca 1 mikromolar CFSE'de yeniden süspanse edin. Ardından, hücreleri PBS ile yıkayın ve hacmi mililitre başına 2 x 106 T hücre nihai konsantrasyonuna yeniden ayarlayın.
İşlem görmüş dendritik hücrelerin 100 mikrolitresini, 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğunda 100 mikrolitre CFSE etiketli CD4 CD4 pozitif T hücresi ile birlikte kültürleyin ve mililitre başına 100 nanogram OVA peptidi 322-329 ekleyin hücrelere, 2 ila 3 günlük inkübasyondan sonra T hücrelerinin CFSE yoğunluğunu akış sitometrisi ile ölçerek.