Mast Hücrelerinde Salgı Granüllerinin Ekzositozunu Görselleştirmek için İn Vitro Bir Teknik

Mast hücreleri içeren odacıklı bir kapak camı alın - salgı granülleri olan bağışıklık hücreleri veya enflamatuar mediatörler içeren SG'ler.

PH'a duyarlı bir floresan raportör ile birlikte IgE antikorları ekleyin ve inkübe edin.

Antikorlar, mast hücreleri üzerindeki Fc reseptörlerine bağlanır. Muhabirler pinositoz yoluyla içselleştirilir ve ortaya çıkan endozomlar SG'lerle birleşir.

Ortamı çıkarın. Birden fazla IgE bağlayıcı epitop içeren bir antijen ekleyin; Slaytı bir floresan mikroskobu altına yerleştirin ve gerekli uyarma dalga boyunu uygulayın.

SG'lerin asidik pH'ı, muhabir floresansını söndürür.

Antijen, hücre yüzeyindeki IgE reseptör komplekslerine bağlanır ve onları çapraz bağlar.

Antijen aracılı reseptör agregasyonu, SG'lerin plazma zarına doğru göç etmesini tetikler.

Plazma ve SG zarı üzerindeki SNARE proteinleri, ekzositoz olarak adlandırılan zar füzyonuna ve SG yükünün boşaltılmasına aracılık eder.

Ortamın daha yüksek pH'ı, SG alkaliizasyonuna neden olarak raportörlerin floresanı yeniden kazanmasına neden olur.

Gelen SG'ler membranla kaynaşmış olanlarla birleşir. İkinci SG'nin alkalizasyonu, bileşik ekzositozu doğrulayarak floresan geri kazanımına aracılık eder.

Taze FIT