Böcek Pupalarında İnflamatuar Hücre Dinamiklerini Araştırmak için Fotokonversiyon Tekniği
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:44 dk. • July 8th, 2025
Transgenik Drosophila pupa içeren, etiketli yaralı epitel taşıyan, hücre yüzeyi proteinleri yeşil floresan sergileyen cam tabanlı bir tabakla başlayın.
Pupaların bağışıklık hücreleri - veya hemositler, sitoplazmada fotokonvertibl yeşil floroforları ve çekirdekte kırmızı floresan proteinleri eksprese ederek hücre takibini kolaylaştırır.
Yaralı hücreler kemoatraktanları veya enflamatuar molekülleri serbest bırakarak hemositleri yaralı bölgeye çeker.
Konfokal mikroskopi, yeşil epitel hücreleri ile çevrili yaralı alanı ortaya çıkarır.
İyileşme sırasında, yaranın yakınında kırmızı çekirdekli yeşil hemositler, zar çıkıntılarını uzatır - filopodia ve lamellipodia ve yaralı bölgeye doğru göç eder.
Zamanla, kemoatraktan yayılırken, uzaktaki hemositler yaraya doğru göç ederek bir bağışıklık hücresi dalgası oluşturur.
Göçmen hemositlerin alt popülasyonunu 405 nanometre dalga boyu ile aydınlatın. Bu, hemositlerin fotokonvertibl floroforunu geri dönüşü olmayan bir şekilde yeşilden kırmızıya dönüştürür.
Bu fotokonvertif hemositler, yaralı epiteli onarır ve yara bölgesinden uzaklaşır, fotokonversiyon hemositleri fotokonversiyon olmayan hemositlerden ayırır ve inflamatuar hücre dinamiklerini aydın
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin