Antikor Biyodağılımını İncelemek için Bir İn Vivo İmmünofloresan Lokalizasyon Yöntemi

Meme kanserinin bir fare modelini ele alalım. Meme bezi tümörleri, kanser hücreleri, kanserle ilişkili fibroblastlar, adipositler, bağışıklık hücreleri ve tümör damar sistemini içerir.

Florofor konjuge tümöre özgü antikorları intravenöz olarak enjekte edin.

Tümör damar sistemine ulaştıktan sonra, antikorlar damar endotelyumu ve yakındaki kanser hücreleri üzerindeki tümöre özgü transmembran proteinlere bağlanır.

Meme bezini cerrahi olarak izole edin ve dondurucu bir ortama batırın.

Bir slayt üzerinde kriyo-kesitler elde edin ve donma ortamını çıkarmak için bir tampon ile durulayın.

Doku mimarisini korumak için bölümleri düzeltin. İmmün boyamayı geliştirmek için bir deterjan ve spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir bloke edici çözelti uygulayın.

Kan damarı endotel üzerindeki adezyon molekülleri için spesifik bir birincil antikor ve birincil antikora bağlanan ve vaskülatürü etiketleyen florofor konjuge bir ikincil antikor ekleyin.

Kızağa bir montaj ortamı ekleyin ve bir lamel yerleştirin.

Konfokal bir mikroskop altında, floresan olarak işaretlenmiş tümör damar sistemi içindeki ve çevresindeki tümöre özgü antikorların biyolojik dağılımını değerlendirin.

Metin protokolü