Mantar Sporu Fagositozunun İnsan Fagositleri ile Kantitatif Akış Sitometrik Ölçümü

Bir insan lökosit süspansiyonu içeren çok kuyulu bir plaka alın. FITC etiketli patojenik mantar sporları ekleyin.

İnkübasyon sırasında, sporlar şişer ve sert hidrofobik protein tabakalarını kırar, bu da fagositik hücreler üzerindeki spesifik örüntü tanıma reseptörleri tarafından tanınan hücre duvarı polisakkaritlerini açığa çıkarır.

Bu bağlanma, hücre içi sinyal yollarını tetikleyerek aktinin yeniden düzenlenmesine ve fagozomlar içinde sporun içselleştirilmesine yol açar.

Fagositlerin aktivasyon durumuna bağlı olarak, bazı sporlar içselleştirilmeden hücrelere yapışık kalır.

Kuluçka sonrası, hücreleri toplayın ve taze bir tüpe aktarın.

merkezkaç. Hücreleri bir tamponda yeniden süspanse edin ve bunları çok kuyulu bir V-alt plakaya aktarın.

Yapışan sporlar üzerinde maruz kalan FITC moleküllerine bağlanan ve onları karşı boyayan florofor etiketli anti-FITC antikorlarını tanıtın.

merkezkaç. Hücreleri bir tampon içinde yeniden süspanse edin ve bunları akış sitometresi tüplerine aktarın.

İçselleştirilmiş ve hücreye bağlı sporları ayırt etmek için akış sitometrisi yapın.

İçselleştirilmiş sporlar içeren fagositler FITC sinyalleri gösterirken, yapışık sporlara sahip hücreler FITC ve karşı le