JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:34 dk. • July 8th, 2025
Lameller üzerine yapışan osteosarkom hücreleri içeren çok kuyulu bir plaka alın.
Bu kemik kanseri hücreleri, strese neden olan bir kimyasalla önceden işlenir ve bu da stres granül oluşumuna neden olur.
Stres granülleri, translasyon yapmayan mRNA'ları, küçük ribozomal alt birimleri, RNA bağlayıcı proteinleri veya RBP'leri, translasyonla ilgili faktörleri ve sinyal proteinlerini içeren sitoplazmik membransız organellerdir.
Ortamı atın ve hücreleri tamponla yıkayın. Hücresel morfolojiyi korumak için hücreleri sabitleyin.
Hücre içi hedeflere erişmek için hücreleri geçirgen hale getirin. Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bloke edici proteinler ekleyin.
Stres granülleri içindeki spesifik RBP'lere ve translasyonla ilgili faktörlere bağlanan birincil antikorları tanıtın.
Farklı florofor etiketli ikincil antikorlar ve Hoechst boyası ile inkübe edin.
İkincil antikorlar, stres granülü ile ilişkili proteinlere bağlı birincil antikorlara bağlanırken, Hoechst molekülleri DNA'yı boyar.
Montaj ortamını kullanarak hücre içeren lameller monte edin.
Bir floresan mikroskobu kullanarak, ilişkili proteinlerin birlikte lokalizasyonu ile karakterize edilen floresan odaklar olarak görünen
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin