JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:59 dk. • July 8th, 2025
Kırmızı kan hücreleri veya RBC'ler ve beyaz kan hücreleri veya monositler ve granülositler gibi WBC'ler ve diğer kan hücreleri dahil olmak üzere insan tam kanını içeren tüplerle başlayın.
Bir süperoksit indikatörü ve etiketlenmemiş bakteriler olan dihidroetidyumu tek bir tüpe ekleyin. Diğer tüpü yeşil florofor etiketli bakterilerle tedavi edin.
Granülositler ve monositler, bakterilerin patojenle ilişkili molekülleri ile etkileşime girerek onları fagozomların içine çeker.
Bu, fagozomal membran enzimi NADPH oksidazı aktive ederek moleküler oksijeni bir süperoksit anyonuna indirger.
Süperoksit anyonu ayrıca hidrojen peroksit üretir - reaktif bir oksijen türü veya oksidatif bir patlamaya neden olan ROS.
Fagozom içinde ROS, bakteri DNA'sını boyayan ve kırmızı bir floresan veren 2-hidroksi etidyum oluşturmak için dihidroetidyumu oksitler.
Hücre dışı floresansı söndürmek için bir söndürücü tanıtın.
Potansiyel RBC girişimini ortadan kaldıran bir lysing solüsyonu ekleyin ve WBC'leri düzeltin.
Akış sitometrisinde, yeşil floresanslı hücreler granülositlerin ve monositlerin fagositik aktivitesini doğrularken, başka bir tüpte kırmızı floresan olan hücreler bu hücrelerde oksijen patlaması aktivi
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin