İşlevselleştirilmiş nano cisimler kullanılarak GFP etiketli yüzey proteinlerinin trans-Golgi ağına gelişinin izlenmesi

GFP etiketli bir yüzey proteini eksprese eden sülfattan yoksun kanser hücreleri ile başlayın.

Radyoaktif işaretli sülfat ve modifiye edilmiş anti-GFP nanokorları ekleyin - bir tirozin-sülfat motifi taşıyan tek zincirli bir antikor ve inkübe edin.

Sülfattan yoksun hücreler, radyoaktif işaretli sülfatları içselleştirir ve bunları hücresel bileşenlere dahil eder.

Anti-GFP nano gövde, GFP etiketli yüzey proteinine bağlanır ve bir vezikül içine endositoz edilir. Bu vezikül, nano gövde-yüzey protein kompleksini, trans-Golgi ağı veya TGN dahil olmak üzere belirli hücre içi yollar boyunca taşır.

TGN içinde, bir substratın varlığındaki sülfotransferaz, bir radyoaktif sülfatı nano cisim üzerindeki spesifik tirozin kalıntılarına aktarır ve böylece onu radyo-etiketleme yapar.

Hücreleri yıka. Sonra, hücreleri parçalayın.

Büyük hücresel kalıntıları gidermek için lizatı santrifüjleyin. Nikel boncuk bazlı bir saflaştırma yöntemi kullanarak nano cisimleri izole edin.

Radyoaktif işaretli nano gövdeyi farklı bantlara ayırmak için izole edilmiş fraksiyonu bir SDS-PAGE jel üzerine yükleyin.

Jeli otoradyografiye tabi tutun.

Ortaya çıkan otoradyograf, radyoaktif işaretli nano gövdenin varlığını gösteren