JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:59 dk. • July 8th, 2025
Nötrofil serin proteazlar veya NSP'ler içeren bir mikroplaka alın. Nötrofiller tarafından salgılanan proteolitik aktiviteye sahip bu çözünür enzimler, enflamatuar yanıtlarda işlev görür.
NSP'ler için bir bölünme alanı görevi gören bir tanıma motifi taşıyan floresan raportör probları ekleyin. Problar bir donör ve bir alıcı florofora konjuge edilir.
Belirli bir dalga boyu ile uyarıldığında, donör florofor enerji yayar. Vericiye yakınlığı nedeniyle, alıcı florofor enerjiyi emer ve farklı bir dalga boyunda floresan yayar.
Verici ve alıcı sinyallerini ayrı ayrı tespit edin ve NSP aktivitesini değerlendirmek için verici-alıcı oranını hesaplayın. Düşük bir oran, prob bölünmesinin yokluğunda donör floresansının söndürüldüğünü gösterir.
NSP'ler, problar üzerindeki tanıma motifini tanır ve parçalayarak alıcıyı serbest bırakır.
Alıcıya olan mesafe, donör floroforundan floresan emisyonunu mümkün kılarak donör-alıcı oranını artırır. Yüksek bir oran, NSP'ler tarafından verimli prob bölünmesini gösterir.
Enzimleri buz üzerinde çözün ve metin el yazmasında açıklandığı gibi bir enzim standart eğrisi oluşturun. Standart hazırlığa paralel olarak, balgam örneklerini aktivasyon tamponunda seyreltin. Pl
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin