Önceden Aktive Edilmiş CD8 + T Hücrelerinin Kanser Hücrelerine Karşı Sitotoksisitesini İncelemek İçin Bir İn Vitro Test
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 5:04 dk. • July 8th, 2025
İki CD8 + T hücresi popülasyonunu ele alalım: T hücresi ve ko-stimülatör reseptörlerin antikor aracılı katılımı yoluyla önceden aktive edilmiş efektör CD8 + T hücreleri ve miyeloid türevi baskılayıcı hücreler tarafından inhibe edilen baskılanmış CD8 + T hücreleri.
Bu T hücrelerini, nükleer kısıtlı bir floresan proteini eksprese eden kanser hücreleri ile bazal membran kaplı kuyucuklara ekleyin.
Pipet: florojenik bir kaspaz-3 substratı - kaspaz-3 tanıma bölgesi içeren bir peptit ile konjuge edilmiş DNA bağlayıcı bir florojenik boya.
Kuluçkaya yatmak. Efektör T hücre reseptörleri, kanser hücreleri üzerindeki sınıf I MHC-peptit kompleksine bağlanarak perforinler ve granzimler içeren sitotoksik granüllerin salınımını tetikler.
Perforinler, kanser hücre zarı gözenekleri oluşturarak granzim girişine ve kaspaz aktivasyonuna izin vererek apoptozu başlatır.
Aktive edilmiş kaspazlar ayrıca florojenik kaspaz substratını parçalayarak DNA'ya ve floresanlara bağlanan boyayı serbest bırakır.
Bir floresan mikroskobu altında, efektör T hücreleri ile birlikte kültürlenen kanser hücreleri, kanser hücresi apoptozunu gösteren çift nükleer floresan sergiler.
Buna karşılık, baskılanmış T hücreleri ile bir
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin