İmmün Ortaya Çıkarma Üzerine Pirinç Dokularında Reaktif Oksijen Türleri Üretimini Tespit Etmek İçin Bir Test

Pirinç fidelerinden kesilmiş tek tip kılıf segmentleri ve pirinç bitkisi yapraklarından elde edilen yaprak diskleri içeren bir mikroplaka alın.

Steril su ekleyin ve yara stresinden iyileşmeyi sağlamak için gece boyunca inkübe edin.

Patojenle ilişkili bir moleküler model veya PAMP görevi gören bakteriyel flagelladan türetilen bir immünojenik peptit ekleyin.

Kesilen kenarlardaki bitki hücreleri, örüntü tanıma reseptörleri aracılığıyla PAMP'lara bağlanır.

Bağlanma, solunum patlaması oksidaz homoloğu veya RBOH olarak adlandırılan plazma zarı lokalize bir enzimi aktive ederek aşağı akış sinyalini tetikler.

Aktive edilmiş RBOH, apoplastta - hücreler arası boşlukta reaktif oksijen türleri veya ROS üretir. Üretilen ROS, hidrojen peroksite dönüştürülür.

Bir peroksidaz enzimi ve bir kemilüminesan substrat ekleyin.

Peroksidaz, substratı, enerjiyi ışık olarak serbest bırakan ve temel duruma geri dönen uyarılmış bir durum ara ürününe dönüştürmek için hidrojen peroksit kullanır.

PAMP tedavisinden hemen sonra bir ROS patlamasını gösteren keskin bir artışı tespit etmek için her iki doku tipinde de lüminesansı ölçün.

ROS testinden bir gün önce ön işlem için 10 günlük pirinç fidelerinin kılıfını kes