Karışık Bir T Hücresi Popülasyonunda Alloreaktivitenin Ölçülmesi

Fare dendritik hücreleri veya alloantijenleri veya kendi kendine antijenlerin genetik varyantlarını taşıyan DC'leri içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.

Yabancı antijenleri tanırken, kendi antijenlerine reaktif olmayan alloreaktif T hücreleri de dahil olmak üzere fare T hücrelerini tanıtın.

Alloreaktif T hücreleri bu alloantijenleri tanır ve DC'lerle etkileşime girerek F-aktin yeniden düzenlenmesi de dahil olmak üzere hücre iskeletinin yeniden düzenlenmesini tetikler.

Bu, T hücreleri üzerindeki reseptörlerin, DC'ler üzerindeki ko-uyarıcı moleküllerle etkileşime girmesini ve hücresel bir bağlantı - immünolojik bir sinaps oluşturmasını teşvik eder.

Hücreleri sabitleyin, bir tüpe aktarın ve T hücresi ve DC reseptörlerine özgü florokrom etiketli antikorlardan oluşan bir kokteyl ekleyin ve farklı floresan verin.

Bağlanmamış antikorları çıkarın ve hücreleri, hücrelere nüfuz eden geçirgenleştirici bir ajan ve F-aktin'e bağlanan yeşil florofor etiketli protein belirteçleri içeren bir tamponda yeniden süspanse edin.

Hücreleri nükleer boya içeren bir tamponda santrifüjleyin ve yeniden süspanse edin, çekirdekleri kırmızıya boyayın.

Görüntüleme akış sitometrisini kullanarak, sinaps oluşum