JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:08 dk. • July 8th, 2025
İndüklenebilir bir promotör altında salgılanan embriyonik alkalen fosfataz veya SEAP enzimi geni ile raportör makrofajlar içeren tüpleri alın.
Bir tüpte, makrofaj Toll benzeri reseptör 2 veya TLR2 için spesifik bir antikor ekleyin ve aktivitesini nötralize edin.
Bir diğerinde, TLR4 sinyalini bastırmak için bir inhibitör ekleyin. Son tüpü tedavi edilmeden bırakın.
Hücre nekrozu sırasında salınan proteinler olan adsorbe edilmiş bir hasarla ilişkili moleküler desenler veya DAMP'ler tabakası ile odacıklı bir slayt alın.
Tedavi edilmiş ve tedavi edilmemiş makrofajları ayrı oyuklara ekleyin ve inkübe edin.
Tedavi edilmemiş makrofajlar üzerindeki TLR2 ve TLR4, DAMP'lere bağlanarak nükleer faktör-kappa-B veya NF-κB ve aktivatör protein-1 veya AP-1 transkripsiyon faktörlerini aktive eder.
Bunlar çekirdeğe yer değiştirir ve hücre dışı salgılanan SEAP üretimini yukarı regüle ederek SEAP promotörüne bağlanır.
SEAP içeren süpernatanı, kromojenik bir substrat içeren bir mikroplakaya aktarın.
SEAP, alt tabakayı hidrolize ederek mor-mavi renkli bir ürün üretir. Emilimi ölçün.
TLR2 nötralizasyonu, SEAP üretimini güçlü bir şekilde azaltır ve TLR2'yi birincil aracı olarak gösterir.
Adsorbe edilmiş bi
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin