TNFa'ya Karşı Antikorların Anti-Apoptotik Aktivitesini Belirlemek için İn Vitro Bir Yöntem

Serumdan yoksun ortamda fare fibroblastları içeren çok kuyulu bir plaka alın. TNFa'ya özgü antikorların seri dilüsyonlarını ekleyin.

İnflamatuar bir sitokin olan TNFα ekleyin.

Kuluçkaya yatmak. Serum yoksunluğu hücresel strese neden olur ve hücreleri TNFα aracılı apoptoza duyarlı hale getirir.

Serumdan yoksun hücreler üzerindeki reseptörlerine TNFα bağlanması, hücre içi sinyal kaskadlarını tetikleyerek kaskadı aktive eder ve apoptozu indükler.

Bununla birlikte, TNFa'ya antikor bağlanması, kaspaz aktivasyonunu inhibe ederek reseptör bağlanmasını önler.

İnkübasyon sonrası, ATP ve magnezyum iyonları ile birlikte deterjan, prolüminesan kaspaz substratı ve bir lusiferaz enzimi içeren bir reaktif karışımı ekleyin. Karıştırın ve inkübe edin.

Deterjan, zarlara nüfuz ederek TNFa'nın neden olduğu hücrelerden kaspazları serbest bırakır.

Biyolüminesan substrat, bir kaspaz tanıma bölgesi içerir. Spesifik kaspazlar substratı parçalayarak aminolusiferin üretir.

Lusiferaz, substratı olan aminolusiferini oksitleyerek ışık emisyonuna neden olur.

TNFα'yı nötralize etmek ve TNFα'nın neden olduğu apoptozu önlemek için TNFα spesifik antikorlarının gücünü gösteren, artan antikor konsantrasyonları ile lüm