Toll Benzeri Reseptör Sinyal İnhibisyonu için Biyoaktif Nanopartikülleri Taramak İçin Bir Test
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:53 dk. • July 8th, 2025
Salgılanan embriyonik alkalin fosfataz veya SEAP genini veya indüklenebilir promotörler altında salgılanan bir lusiferaz genini barındıran farklı raportör makrofajlara sahip çok kuyulu bir plaka alın.
Belirlenen kuyucuklara lipopolisakkaritler veya LPS ile karıştırılmış farklı peptit-altın nanopartikül hibritleri içeren ortam ekleyin.
LPS, makrofaj toll benzeri reseptörlere veya TLR'ye bağlanarak endozoma içselleştirmeyi tetikler.
Endozomal proton pompası protonları içeriye taşır. Asitleşme, transkripsiyon faktörlerini aktive ederek TLR sinyalini tetikler.
Bu faktörler, SEAP veya lusiferaz üreten raportör genlerin ekspresyonunu indükler.
Alternatif olarak, LPS'nin hibritlerle birlikte içselleştirilmesi, negatif yüklü peptit gruplarının luminal protonları tecrit etmesine, endozomal asitleşmeyi önlemesine ve TLR sinyalini inhibe etmesine neden olur.
Ortamı toplayın, süpernatanı ayırmak için santrifüjleyin ve SEAP ve lusiferaz için substratlar ekleyin.
SEAP, alt tabakasını renkli bir ürüne dönüştürürken, lusiferaz, lüminesans üretmek için alt tabakasını katalize eder.
Raportör sinyallerinde bir azalma, hibritlerin TLR sinyal inhibisyonundaki etkinliğini gösterir.
1.5 mililitrelik eppe
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin