JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 2:49 dk • July 8th, 2025
Antimikrobiyal bir peptit olan bakteriyosin üreten laktik asit bakterileri veya LAB içeren fare dışkı süspansiyonunu alın ve önceden ısıtılmış bir LAB seçici yumuşak agar ortamına aşılayın.
Ortamı bir agar plakasına dökün ve ilk katmanı oluşturun.
İkinci bir agar tabakasını kaplayın ve inkübe edin.
İlk katman, salgılanan bakteriyosin moleküllerinin kolonilerden çevredeki ortama yayılmasına izin vererek seçici olarak LAB büyümesini destekler.
İkinci katman, bakteriyosinin difüzyonuna izin veren ve yüzeydeki LAB kolonilerinin büyümesini önleyen hücresiz bir ortam içerir.
Şimdi, bakteriyosine duyarlı bir suş içeren üçüncü bir agar tabakası dökün.
Üçüncü tabakada üreyen bakteriler alt tabakalardan yayılan bakteriyosin ile karşılaşırlar.
Bakteriyosin, hassas bakterilerin hücre zarını bozar, hücresel homeostazı bozar ve hücre ölümüne neden olur, üçüncü katmanda açık bir bölge olarak görülebilir.
Bakteriyosin gücünü değerlendirmek için bölge çapını ölçün.
Dışkı örneklerinde bakteriyosin üreten bakteri hücrelerini saymak için, bakteriyosin üreticisinin seyreltilmiş hücrelerini 4 mililitre önceden ısıtılmış MRS yumuşak agar'a aktarın. Agarı girdaplama ile karıştırın ve hücreleri bir MRS %1.5 agar plakasına dökün. Bu katman ilk katman olarak adlandırılır.
Tüm hücreleri yumuşak agar içine gömmek için ilk katmana 4 mililitre hücre içermeyen %0.8 MRS yumuşak agar aktarın. Bu katman, hücrelerin agar plakalarının yüzeyinde koloniler halinde büyümesini önlemek içindir.
Steril başlıkta, hücre büyümesi ve koloni oluşumu için plakaları 30 santigrat derecede 20 ila 24 saat inkübe etmeden önce kapağı beş ila 10 dakika çıkararak kurutun.
Bakteriyosin üreten kolonileri tanımlamak için, her plaka için 4 mililitre önceden ısıtılmış yumuşak agar ile uygun bir indikatör suşunun gece boyunca 40 mikrolitre kültürünü karıştırın. Karışımı plakalara dökün. Bu katman üçüncü katman olarak adlandırılır.
Hücre büyümesi ve koloni oluşumu için plakaları daha önce olduğu gibi kurutun ve inkübe edin. Bakteriyosin üreten koloniler, kolonilerin etrafında açık inhibisyon bölgelerine sahiptir.
Bu çalışma, fare dışkı örneklerinden elde edilen laktik asit bakterilerinin (LAB) bakteriyosin üretimini incelemektedir. Metodoloji, bakteriyosin gücünü değerlendirmek ve bakteriyosin üreten kolonileri tanımlamak için agar katmanlama yöntemini içermektedir.
Fare dışkı örneklerinden elde edilen bakteriyosin üreten laktik asit bakterilerinin kantitatif değerlendirmesi, antimikrobiyal adayların erken evre değerlendirmesine olanak tanır. Bu katmanlı agar deneyi, mikrobiyal kaynaklı peptid aktivitesini sorgulamak için tekrarlanabilir bir platform sağlayarak hedef doğrulama ve mekanistik risk azaltma süreçlerinde öngörücü güveni destekler. Bu yaklaşım, ileri translasyonel incelemeler için güçlü antimikrobiyal üreticileri ayırt ederek portföy önceliklendirmesine bilgi sağlar.
Bu analiz, bakteriyosin üreten suşların daha ileri karakterizasyon için erken dönemde tanımlanmasını ve kantitatif olarak sıralanmasını sağlayarak, keşiften preklinik aşamaya kadar olan sürece entegre olmaktadır.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 29 Ağustos 2026