Bir Test Bileşiğinin Et Suyundaki Mikobakterilere Karşı Etkinliğinin Değerlendirilmesi

Bir aminoglikozit antibiyotik olan test bileşiğinin seri dilüsyonlarını içeren çok kuyulu bir plaka alın.

Kuyucuklara patojenik bir bakteri olan Mycobacterium tuberculosis'in bir süspansiyonunu ekleyin ve kuluçkaya yatırın.

Sitoplazmada, test bileşiği mikobakteriyel 30S ribozomal alt birimine bağlanarak normal protein sentezini inhibe eder ve sonunda mikobakteriyel ölüme yol açar.

İnkübasyon sonrası, kültürlere zayıf floresan suda çözünür bir boya olan resazurin ekleyin. Kuluçkaya yatmak.

Canlı metabolik olarak aktif mikobakterilerin içinde, dehidrojenaz enzimleri mavi renkli resazurini pembe renkli bir floresan resorufine indirger.

Bir floresan plaka okuyucu kullanarak, kuyucuklardaki resorufin floresan yoğunluğunu ölçün.

Artan test bileşiği konsantrasyonları ile düşük bir floresan yoğunluğu değeri, mikobakterilere karşı sitotoksik etkilerini göstermektedir.

Bir resazurin testi yapmak için, M. tuberculosis'i 7H9ADST'de orta log fazına kadar büyütün. Kültürü 7H9ADST ile 0.01 OD_600'e seyreltin. Bileşikleri test konsantrasyonlarının iki katına kadar seyreltmek için 7H9ADST kullanın ve her seyreltilmiş bileşiğin 100 mikrolitresini şeffaf 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna alikot e