JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:34 dk. • July 8th, 2025
Buz üzerinde memeli hücreleri içeren bir mikroplaka alın.
Seçilen kuyucuklara kalsiyum içeren bir ortam ve diğerlerine kalsiyum içermeyen bir ortam ekleyin.
Bakteriyel gözenek oluşturan bir toksinin monomerlerini tanıtın. Düşük bir sıcaklık, monomer agregasyonunu önleyerek hücre zarı kolesterolüne bağlanmayı kolaylaştırır.
Fizyolojik bir sıcaklıkta inkübe edin, kolesterole bağlı monomerlerin oligomerleşmesine ve zara girmesine izin vererek bir gözenek oluşturun.
Hücre dışı kalsiyum içeren kuyularda, gözenek kalsiyum akışına neden olur.
Akın, toksinin ekzozomal dökülmesini ve zarın yeniden sızdırmazlığını tetikler.
Hücre içi kalsiyum artışı ayrıca lizozomal ekzositozu indükleyerek zarın sfingomyelinini seramide dönüştüren bir enzim salgılar.
Seramidle zenginleştirilmiş zar, toksin endositozunu tetikleyerek zarı yeniden kapatır.
Hücre dışı kalsiyum içermeyen kuyucuklarda zarın yeniden sızdırmazlığı engellenir.
Propidyum iyodür veya PI ekleyin - bir floresan boya - onarılmış bir zara sahip hücrelere giremez, ancak DNA'yı bağlamak için hasarlı hücrelere girer ve floresan yayar.
Membranın yeniden sızdırmazlık verimliliğini değerlendirmek için floresansı belirli aralıklarla ölçün.
Onarım
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin