Makrofajlar ve sızmış bağışıklık hücreleri arasındaki ilişkiyi incelemek için immünohistokimya

0 görüntüleme4:00 dk • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Lenfositler ve makrofajlar dahil olmak üzere insızmış bağışıklık hücreleri ile formalinle sabitlenmiş, deparafinize edilmiş ve rehidre edilmiş temporal arter biyopsi bölümleri içeren bir slaytla başlayın.

Aktive edilmiş makrofajlar, makrofajları diğer bağışıklık hücrelerinden ayıran, hastalıkla ilgili bir belirteç olan folat reseptörü beta veya FR-β eksprese eder.

Yüzey reseptörlerini almak için slaytı önceden ısıtılmış bir tampona aktarın.

Kesiti, hücre içi peroksidaz aktivitesini bloke eden hidrojen peroksit ile tedavi edin.

Bu proteinleri eksprese eden bağışıklık hücrelerine bağlanan CD3, CD68 ve FR-β'yi hedefleyen birincil antikorların bir karışımını tanıtın.

Birincil antikorlarla etkileşime giren biyotinile edilmiş ikincil antikorları ekleyin ve yıkayın.

Biotin ile bağlanan streptavidin konjuge enzimleri ile kaplayın.

Enzimlerle etkileşime giren ve lokalize kahverengi çökeltiler üreten kromojenik bir substrat ile muamele edin.

Bir karşı leke ekleyin - hematoksilen, çekirdekleri maviye boyayın.

Mikroskobik olarak küçük, yuvarlak, kahverengi lekeli hücreleri CD3 eksprese eden lenfositler ve büyük, düzensiz, kahverengi lekeli hücreleri CD68 ve FR-β eksprese eden makrofajlar olarak tanımlayın.

Toplam sızmış bağışıklık hücreleri arasındaki oranlarını bulmak için bölümdeki makrofajları ölçün.

Antijen alımı için, rafı 200 mikrolitre 95 santigrat derece, litre başına 10 milimolar, 30 dakika boyunca sitrat tamponu olan bir cam kaba aktarın. İnkübasyonun sonunda, beş dakika boyunca akan su ile durulamadan önce slaytların 20 dakika oda sıcaklığına soğumasını bekleyin.

Endojen peroksidaz aktivitesini gidermek için, önce her doku örneğinin etrafına bir daire çizmek için hidrofobik bir işaretleyici kullanın, örnekleri 200 mikrolitre% 3 hidrojen peroksit içinde 10 dakika inkübe etmeden önce, ardından 200 mikrolitre Tris tamponlu salin solüsyonunda üç yıkama yapın veya yıkama başına TBSS. Son yıkamadan sonra, fazla tamponu çıkarmak için her bir slaytı hafifçe vurun ve oda sıcaklığında nemli bir odada bir saatlik inkübasyon için her slayta 200 mikrolitre birincil antikor kokteyli ve bir lamel ekleyin.

Kuluçka süresinin sonunda, lamelleri atın ve slaytları taze TBSS'de iki dakikalık üç yıkama ile durulayın. Fazla tamponu çıkardıktan sonra, oda sıcaklığında nemli odada 45 dakikalık bir inkübasyon için her slayta 200 mikrolitre uygun bir biyotinile edilmiş ikincil antikor çözeltisi ve bir lamel ekleyin. Lamelleri attıktan sonra, slaytları gösterildiği gibi TBSS ile durulayın. Fazla arabelleği çıkarın.

Bölümleri 200 mikrolitre DAB alt tabaka tamponu ile oda sıcaklığında 10 dakika boyunca etkinleştirin. İnkübasyonun sonunda, slaytları TBSS ve akan musluk suyu ile 10 dakika yıkayın, ardından üç dakika hematoksilen ile karşı boyama yapın. Ardından, her bir kızağa 70 mikrolitre uygun bir montaj ortamı ekleyin ve lamel yerine indirilirken kabarcık oluşmasını önlemek için montaj ortamının üzerine yavaşça bir cam lamel eğin.

Histopatolojik analiz için, slaytı bir ışık mikroskobu sahnesine yerleştirin ve ilk doku bölümünün vasküler mimarisini değerlendirin. Ardından, bölüm başına lenfosit sayısına göre makrofaj sayısını ölçün.

08:47

Çeşitli Dokularda Bağışıklık Hücreleri Hastalık bağımlı Dağıtım Fareler ve Değerlendirilmesi Deneysel Otoimmün Ensefalomyelitli indüksiyon

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:54

Yüzey gelişmiş rezonans Raman nanoprobe Ratiometry mikroskobik yumurtalık kanseri folat reseptör via algılamak için saçılma hedefleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:01

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Sırasında Merkezi Sinir Sisteminde Lenfosit Infiltrasyonunun Akış Sitometrik Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:10

Yetişkin Karaciğer Hücrelerinin Karma İlköğretim Kültürler Makrofajlar yalıtın Basit ve Etkin Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:42

Bir In vitro Model

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:43

Akış Sitometresi ile Merkezi Sinir Sisteminden Mikroglia ve Monosit Türevi Makrofajların Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:05

Floresan-aracılı tomografi algılama ve fare bağırsak iltihabı makrofaj ile ilgili miktar

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:36

In vitro assay tümör çalışma-macrophage etkileşim

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:23

Eş-Kültürlerde M1 Makrofaj-4T1 Fare Mammary Karsinom Hücrelerinde Fagositik Aktivitenin Zaman Atlamalı 2D Görüntülemesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:40

Fare Beyninde Mikroglial Yoğunluk, Morfoloji ve Periferik Miyeloid Hücre Infiltrasyonu Analizi için IBA1 ve TMEM119 Kullanılarak İmmünofloresanS Boyama

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026