JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 6:20 dk. • July 8th, 2025
Farklı hücre döngüsü aşamalarında antijene özgü CD8 + T hücreleri içeren, antijenle aşılanmış bir fareden ikincil lenfoid organ hücrelerini alın.
G1, S, G2 ve M aktif olarak bölünen hücrelerin aşamalarıdır, G0 aşamasındaki hücreler ise hareketsizdir.
Ölü hücreleri etiketlemek için bir floresan canlılık boyası ve T hücresi yüzey belirteçleri CD3 ve CD8'e bağlanan florofor etiketli antikorlar ekleyin.
Antijene özgü T hücrelerini etiketleyerek T hücresi reseptörlerini bağlamak için florofor konjuge antijenik peptit-MHC multimerlerini tanıtın.
Bir tampon kullanarak hücreleri sabitleyin ve geçirgen hale getirin.
Hücre proliferasyonu ile ilişkili bir nükleer proteini bağlamak için florofor etiketli antikorları tanıtın - aktif olarak bölünen hücreleri boyayın.
DNA'yı etiketlemek için bir floresan lekesi ekleyin.
Akış sitometrisini kullanarak, canlı hücreleri seçin ve yüzeye bağlı etiketler aracılığıyla antijene özgü CD8 + T hücrelerini tanımlayın.
DNA leke yoğunluğu, daha düşük DNA miktarına sahip G0 ve G1 hücrelerini, daha yüksek DNA miktarına sahip S, G2 ve M hücrelerinden ayırır. Nükleer proteine özgü antikorun yokluğu G0 hücrelerini ayırır.
10X geçirgenlik tamponunu damıtılmış su ile
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin