JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:34 dk. • July 8th, 2025
Mikroglia, monositler ve nötrofiller dahil olmak üzere fare retinal miyeloid hücrelerinin tek hücreli bir süspansiyonunu içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.
Mikroglia - veya retinal fagositik bağışıklık hücreleri, intravitreal olarak önceden enjekte edilen, yutulmuş florofor etiketli mantar kökenli biyopartiküller nedeniyle floresan sergiler.
Santrifüjleyin ve Fc reseptör antikorları ekleyin, spesifik olmayan etkileşim bölgelerini bloke edin.
CD11b, Ly6C ve Ly6G yüzey proteinlerini hedefleyen, onları eksprese eden miyeloid hücrelerle etkileşime giren florofor etiketli antikorlardan oluşan bir kokteyl tanıtın.
Bağlanmamış antikorları çıkarın. Hasarlı zarlardan nüfuz eden ve sadece ölü hücreleri boyayan propidyum iyodür ile tedavi edin.
Akış sitometrisinde, ölü hücreleri dışlamak ve floresan olmayan canlı hücreleri tanımlamak için propidyum iyodürü uyarın.
Hücreleri mor bir lazerle aydınlatın; uyarılmış canlı hücreler, CD11b eksprese eden miyeloid hücreleri belirtir.
Daha sonra, CD11b pozitif hücreler içindeki uzak kırmızıya yakın floroforu uyararak kırmızı bir lazerle aydınlatın, bu da Ly6C eksprese eden monositleri ve Ly6G eksprese eden nötrofilleri gösterir.
Hücreleri mavi b
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin