JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:57 dk. • July 8th, 2025
Lenfositler ve monositler dahil olmak üzere karışık hücreli bir popülasyon olan periferik kan mononükleer hücrelerini veya PBMC'leri alın.
Ölü hücreleri ayırt etmek için bir floresan canlılık boyası ve farklı hücre tiplerini tanımlamak için floresan etiketli bir antikor kokteyli ekleyin.
Florokrom A-konjuge antikorlar, T hücrelerinde CD3, γδ T hücre reseptörü veya γδ T hücrelerinde TCR ve doğal öldürücü veya NK hücrelerinde CD56 gibi yüzey belirteçlerine bağlanır.
Florokrom B-konjuge antikorlar, T hücrelerinde CD4 ve CD8'e, B hücrelerinde CD19'a ve monositlerde CD14'e bağlanır.
Akış sitometrisini kullanarak, canlı hücre alt kümelerini tanımlayın.
CD8+ ve CD4+ T hücreleri CD3+ iken, CD4+ hücreleri CD3 tek pozitif ve CD3-CD8 çift pozitif hücreler arasında yer alır.
γδ T hücreleri, CD4+ ve CD8+ hücrelerine kıyasla γδ TCR'leri ve daha yüksek CD3'ü eksprese eder.
B hücreleri ve NK hücreleri CD3-'tür, ancak B hücrelerinde CD19 ve NK hücrelerinde CD56 ile tanımlanırlar.
Monositler CD14 ekspresyonu ile tanımlanır.
PBMC'leri boyamaya hazırlamak için, her numunenin 100 mikrolitresini 96 oyuklu bir V-alt plakaya aktarın. Plakayı oda sıcaklığında üç dakika boyunca 350 kez g'de santrifüjleyin.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin