Bağışıklık hücreleri tarafından uygulanan reseptör kuvvetlerini değerlendirmek için DNA tabanlı gerilim problarının kullanılması
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 5:58 dk. • July 8th, 2025
Polietilen glikol bağlantılı altın nanopartiküller içeren işlevselleştirilmiş bir cam lamel ile başlayın.
Zıt kollarda iki oligonükleotid ile hibritlenmiş bir DNA saç tokası içeren DNA saç tokası gerginlik probları ekleyin.
Ligand ipliği bir florofor ve biyotin içerirken, çapa ipliği bir söndürücü ve bir tiyol grubu içerir. Bu kurulumda, söndürücü floresansı bastırır.
DNA probları, cam lamele sabitlenerek altın nanopartiküllere bağlanır.
Ligand ipliklerinin biyotin molekülleri ile etkileşime giren streptavidin'i tanıtın.
Önceden bağlanmış streptavidin moleküllerine bağlanan biyotinile ligandlar ekleyin.
Lameli CD8 pozitif T hücreleri ile kaplayın; reseptörleri hareketsizleştirilmiş ligandlarla etkileşime girerek bir reseptör-ligand etkileşim bölgesi oluşturur.
Bu etkileşim, DNA saç tokası yapısını açan, floroforu söndürücüden ayıran ve floresan emisyonunu teşvik eden bir kuvvet oluşturur.
Floresan sinyalini korumak için probların katlanmamış segmentleriyle etkileşime giren floresan olmayan kilitleme şeritlerini tanıtın.
Bağışıklık hücreleri tarafından uygulanan reseptör kuvvetlerini değerlendirmek için floresanı ölçün.
Başlamak için, 25 milimetrelik lamelleri 50 mililitrelik bir be
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin