Enfekte farelerde drenaj lenf düğümlerine cilt dendritik hücre göçünü izlemek için CFSE tabanlı bir test
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:34 dk. • July 8th, 2025
Anestezi uygulanmış bir fare alın. Mycobacterium bovis BCG süspansiyonunu arka ayak pedine enjekte edin.
Deri dendritik hücreleri mikobakterileri tanır ve fagositoz eder.
Ayrıca, işlenmiş mikobakteriyel bileşenler MHC sınıf-II molekülleri üzerinde sunulur.
Hücre geçirgen CFSE boyasını aynı ayak pedine enjekte edin.
Hücre içi esterazlar, CFSE'yi hücre geçirimsiz bir floresan ürüne bölerek hücreleri boyar.
Ayrıca, aktive edilmiş dendritik hücreler lenfatik damarlar yoluyla popliteal lenf noduna göç ederek T hücrelerini aktive eder.
Popliteal lenf düğümünü cerrahi olarak eksize edin ve bir süzgeçten homojenize ederek tek hücreli bir süspansiyon elde edin.
Hücreleri bir tamponda santrifüjleyin ve yeniden süspanse edin.
Hücreleri bir akış sitometri tüpüne aktarın. Hücreleri santrifüjleyin ve bir antikor kokteyli ile tedavi edin.
Fc bloke edici antikorlar Fc reseptörlerini bloke ederken, florofor etiketli antikorlar bağışıklık hücreleri üzerindeki yüzey belirteçleri CD11c ve MHC sınıf-II moleküllerine bağlanır.
Akış sitometrisini kullanarak, yüksek MHC-II ve düşük CD11c ekspresyonu olan CFSE işaretli cilt dendritik hücrelerini tanımlayın ve lenf noduna göçlerini doğrulayın.
Mycobacterium
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin