Bakteri Kaynaklı Antimikrobiyal Bileşiklerin Etkisini Değerlendirmek için Ertelenmiş Bir Büyüme İnhibisyonu Testi

Besin içeren bir agar plakası ile başlayın ve merkeze bir gece boyunca inhibitör üreten birincil bakteri kültüründen bir damla yerleştirin.

Kültürün kurumasına izin verin, minimum bakteri yayılmasını sağlayın ve inkübe edin.

Bireysel bakteriler farklı koloniler oluşturur ve antimikrobiyal bileşikler salgılar - agar boyunca belirli bir mesafeye yayılan inhibitör moleküller.

Rakip bir bakteri suşunun seyreltilmiş bir kültürünü, birincil bakteri kolonileri içeren agar yüzeyine eşit şekilde püskürtün.

İnkübasyon sırasında, antimikrobiyal bileşikler rakip bakterilerle etkileşime girer ve onların temel hücresel süreçlerini bozar.

Bu, söz konusu bölgedeki rakip bakterilerin ölümüne neden olarak bakteri büyümesinde önemli bir düşüşe neden olur.

Antimikrobiyal bileşiklerin bulunmadığı alanda, rakip bakteriler besinleri kullanır ve farklı koloniler oluşturur.

Bu, belirgin bir inhibisyon bölgesi ile farklı bir büyüme modeli oluşturur. Bakteri kaynaklı antimikrobiyal bileşiklerin etkisini değerlendirmek için bu bölgenin çapını ve bölge netliğini belirleyin.

Bakteriyel gece kültürleri hazırlamak için, rakip ve inhibitör suşlarını steril bir BHI agar plakasına sürün ve aerobik olarak yaklaşık 18 saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. 28 mililitrelik evrensel bir şişede, 10 mililitre steril BHI suyunu, gerekli rakip bakteri suşunun tek bir kolonisi ile aşılayın.

Kültürü gece boyunca 37 santigrat derece ve 250 RPM'de evrensel bir orbital çalkalayıcıda inkübe edin. Ertesi gün, aşılamanın plaka üzerine yayılmasını önlemek için agar plakalarının tamamen kuru olduğundan ve kapakta yoğuşma olmadığından emin olun. Gece boyunca kültürün 25 mikrolitresini agar plakalarının ortasına pipetleyin ve kültürü agar boyunca püskürten hava kabarcıklarını önlemek için pipet pistonuna tamamen bastırmaktan kaçının.

Kültürün yayılmasını sınırlamak için kültürün oda sıcaklığında kurumasına izin verin. Ardından, agar plakalarını gece boyunca aerobik olarak 37 santigrat derecede inkübe edin. Emici kağıtla kaplı 2. seviye bir güvenlik kabini altında çalışırken bir gece boyunca kültür büyüttükten sonra, mililitre başına yaklaşık 4 kez 10 ila altıncı CFU verecek şekilde kültürü on kat seyreltmek için BHI suyu kullanın. Ardından, seyreltilmiş kültürü steril bir plastik parfüm buharlaştırıcı şişesine dökün.

Ertelenmiş bir büyüme inhibisyonu testi yapmak için, agar üzerine püskürtmeden önce kültürün püskürtme mekanizmasına yüklendiğinden emin olmak için kültürü buharlaştırıcı şişelerin her birine püskürtün. Agarın yaklaşık 15 santimetre yukarısındaki bir mesafeden, tüm agar yüzeyine yaklaşık 250 mikrolitre seyreltilmiş kültür püskürtün. Plakaları gece boyunca aerobik olarak 37 santigrat derecede inkübe edin.

Ertelenmiş büyüme inhibisyonunu yorumlamak için, püskürtülen rakip suşun büyüme inhibisyon bölgesini milimetre cinsinden ölçün ve inhibitör üreticisinin merkezi noktasının çapını çıkarın. Son olarak, metin protokolüne göre inhibisyon bölgeleri için netlik puanını kaydedin.