Enfekte Primer Makrofajlarda Sitozolik ve Vakuolar Salmonella'yı Ölçmek İçin Bir Test
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 6:27 dk. • July 8th, 2025
Kemik iliği türevli makrofajların bir kültürünü ele alalım. Ortamı çıkarın ve bir floresan sitoplazmik proteini ifade eden Salmonella bakterilerini ekleyin.
Bakteri-makrofaj temasını kolaylaştırmak için santrifüjleyin ve inkübe edin.
Bakteriler makrofaj reseptörlerine bağlanarak bir fagozom içinde içselleştirmeyi kolaylaştırır.
Fagozom, endozomdan türetilmiş veziküllerle birleşir ve aynı anda bakteriler, fagozomu Salmonella içeren bir vakuol veya SCV'ye yeniden şekillendirerek efektörler salgılar.
SCV'lerin bir alt kümesi yırtılır ve içselleştirilmiş bakterileri sitoplazmaya bırakır.
İçselleştirilmemiş bakterileri ortadan kaldırmak için bir antibiyotik ekleyin. Ölü bakteri içeren ortamları aspire edin.
Kolesterole bağlanan deterjan digitonin içeren bir tampon ekleyin.
Kolesterol açısından zengin plazma zarına dijital bağlanma gözenek oluşumuna neden olurken, kolesterol eksikliği olan SCV zarı bozulmadan kalır - diferansiyel geçirgenlik olarak adlandırılan bir fenomen.
Sitozolik bakterileri bağlamak için geçirgen hücrelere giren floresan etiketli antikorlar ekleyin.
Hücreleri ve SCV'leri parçalamak için bir deterjan kullanın ve tüm içselleştirilmiş bakterileri serbest bırakın.
Akış
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin