CXCR4 ile Etkileşime Giren Ajanların Tanımlanması için Hücresel Bir Test

CXCR4'ü eksprese eden yapışmış insan beyni kanseri hücrelerini içeren jelatin kaplı çok kuyulu bir plaka alın.

Ortamı kalsiyuma duyarlı bir boya ile değiştirin. Hücre içi esterazlar, boyayı kalsiyum iyonlarına bağlanan ve artan floresan sergileyen zar geçirimsiz bir ürüne ayırır.

Boyayı çıkarın, yıkayın ve tampon ekleyin.

Plakayı, CXCR4 ile etkileşime giren bileşik ve kemokin CXCL12 içeren plakalara sahip bir floresan mikroplaka okuyucusuna yerleştirin.

Ayarlanan otomatik parametreleri kullanarak, artan bileşik konsantrasyonlarını test kuyularına enjekte edin ve ardından belirli bir CXCL12 konsantrasyonu ekleyin.

Bileşik içermeyen kontrol kuyularında CXCL12, CXCR4'e bağlanır.

Bu bağlanma, kalsiyum iyonlarını sitoplazmaya salarak bir sinyal kaskadını aktive eder, burada boyayı bağlarlar ve floresansı yoğunlaştırır.

Bununla birlikte, test kuyularında, etkileşen bileşikler, CXCL12'nin CXCR4'e bağlanmasını inhibe eder, kalsiyum mobilizasyonunu etkiler ve doza bağlı bir floresan azalmasına neden olur ve bunları CXCR4 antagonistleri olarak doğrular.

Hücre geçişi gününde, siyah duvarlı polistiren 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğunu, 100 mikrolitre% 0.1 jelatin çözeltisi ile şeffaf dipl