JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:20 dk. • July 8th, 2025
α-galaktosidaz A ve asit α-glukozidaz, hücresel metabolizma için çok önemli olan lizozomal enzimlerdir.
α-galaktosidaz A, glikolipidler gibi substratları parçalarken, asit α-glukozidaz glikojeni hidrolize eder.
Enzim aktivitelerini in vitro olarak ölçmek için, sırasıyla bilinen konsantrasyonlarda α-galaktosidaz A ve asit α-glukozidaz içeren numunelerle çok kuyulu plaka kuyuları alın.
Kuyucuklara, bu enzimler için doğal substratları taklit etmek üzere tasarlanmış spesifik florojenik substratlar olan sentetik 4-Metilumbelliferil substratların gerekli hacminde asidik çözeltiler ekleyin.
Karanlıkta kuluçkaya yatın.
α-galaktosidaz A ve asit α-glukozidaz enzimleri, ilgili substratlarını parçalayarak floresan ürünü olan 4-metilumbelliferonu serbest bırakır.
Enzimatik reaksiyonu sonlandırmak için bir alkali tampon ekleyin.
Bir mikroplaka floresan okuyucu kullanarak, sırasıyla α-galaktosidaz A ve asit α-glukozidaz enzim aktivitesini belirlemek için kuyucuklardaki 4-metilumbelliferonun floresan yoğunluğunu ölçün.
Her numunenin hesaplanan miktarını seyreltin ve mikrolitre çözelti başına 0.05 mikrogram alfa-galaktosidaz A veya 0.5 mikrogram asit alfa-glukozidaz elde etmek için taze 1.5 mililit
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin