Bir Viral İnaktivasyon Testi ile Bir Antiviral Test Bileşiğinin Etkinliğinin Değerlendirilmesi

Rekombinant hepatit C virüsü veya salgılanan bir lusiferaz raportörünü kodlayan RNA içeren HCV süspansiyonu olan tüpleri alın.

Teste ve negatif kontrol tüplerine bir antiviral test bileşiği ve çözücü ekleyin.

Test bileşikleri, HCV glikoproteinlerine bağlanarak virüsü etkisiz hale getirir.

İnkübasyon sonrası, sonraki adımlarda bileşik-hücre etkileşimlerini önlemek için karışımları seyreltin.

Bu seyreltilmiş karışımları HCV replikasyonunu destekleyen hepatom tek katmanlarına ekleyin. Kuluçkaya yatmak.

Bileşikle inaktive edilmiş HCV, spesifik hücre yüzeyi reseptörlerine bağlanamazken, aktif HCV glikoproteinleri bu reseptörlere bağlanarak hücresel bağlanmayı kolaylaştırır.

Adsorbe edilmemiş HCV'leri çıkarın. Tampon ile yıkayın ve ortam ekleyin. Uzun süre kuluçkaya yatırın.

Bağlı HCV içselleştirilir, viral RNA'yı serbest bırakır ve hücreden salgılanan viral protein ve lusiferaz sentezine yol açar.

Luciferaz içeren kültür süpernatantlarını toplayın. Santrifüjleyin ve süpernatantlara bir lusiferaz substratı ekleyin.

Lusiferaz, alt tabakayı oksitleyerek ışık yayar.

Kontrol kuyusunda testtekinden daha yüksek bir lüminesans, bileşik tarafından viral inaktivasyonu gösterir.

Viral inaktivasyon