Antiviral Bileşiklerin Taranması için Bir Viral Bağlanma Testi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:47 dk. • July 8th, 2025
Önceden soğutulmuş bir insan hepatom hücresi tek tabakası içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.
Test kuyucuklarını, lusiferaz genini ve bir hedef bileşiği taşıyan genetik olarak değiştirilmiş hepatit C virüsünün bir karışımı ile tedavi edin; kontrol kuyularını sadece virüsle tedavi edin.
Test kuyularında, hedef moleküller viral glikoproteinler ve hücre yüzeyi reseptörleri ile etkileşime girerek viral bağlanmayı önler.
Bununla birlikte, kontrol kuyularında, viral glikoproteinler hücre yüzeyi reseptörleri ile etkileşime girerek bağlanmalarını sağlar. Düşük bir sıcaklık viral girişi engeller.
Süpernatanı çıkarın, bir ortam ekleyin ve viral girişi kolaylaştırarak optimum sıcaklıkta yeniden inkübe edin.
Girişte virüs, ortama salgılanan viral proteinlerin ve lusiferaz enzimlerinin sentezini başlatarak genetik materyali serbest bırakır.
Luciferaz içeren süpernatanı aktarın ve bir substrat ekleyin.
Enzim-substrat etkileşimi, lusiferaz seviyeleri ile orantılı olarak ışık üretir.
Test kuyularındaki daha düşük ışık yoğunluğu, kontrol kuyularına kıyasla, hedef bileşiğin antiviral özelliğini gösterir.
Viral bağlanma tahlili için, 96 oyuklu bir plakada oyuk başına 1 x 104 hücre plakalayın ve
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin