Modifiye Turnusol Testi Kullanılarak Bakteriyel Bir Biyobelirteçin Kolorimetrik Tespiti

Belirli bir bakteriyel biyobelirteçöre bağlandığında aktive olan bir katalitik DNA olan RNA parçalayan bir DNA ile başlayın.

DNAzyme, 5' ucunda biyotin aracılığıyla streptavidin kaplı bir manyetik boncuk ile bağlanır. 3' ucunda, fonksiyonel bir manyetik boncuk oluşturan oligonükleotid bağlantılı bir üreaza bağlanır.

Fonksiyonel manyetik boncuklar içeren bir tüpe bir E. coli lizat ekleyin.

Lizattan elde edilen spesifik bir E. coli biyobelirteci, DNAzim'i aktive ederek RNA bağlantısının bölünmesini tetikler ve DNAzime-üreaz konjugatının ayrılmasına neden olur.

Boncukları hareketsiz hale getirmek ve boncuk bağlı DNAzime-üreaz konjugatını çıkarmak için manyetik bir stand kullanın.

Serbest bırakılan üreaz içeren süpernatanı başka bir tüpe aktarın.

Bir pH indikatör boyası - fenol kırmızısı ve bir üre çözeltisi ekleyin.

Üreaz, üreyi amonyak ve karbondioksite hidrolize eder.

Zayıf bir baz olan amonyak, çözeltinin pH'ını yükselterek E. coli biyobelirtecinin varlığını gösteren bir renk değişikliğine neden olur.

E. coli hücrelerini metin protokolüne göre hazırladıktan sonra, 100 mikrolitre RB ekleyerek ve girdaplayarak 1.5 mililitrelik bir mikrofüj tüpünü önceden yıkayın. Ardından arabelleği