JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:10 dk. • July 8th, 2025
Fizyolojik bir hücre dışı matrisi veya ECM'yi taklit eden, kollajen ile kaplanmış değişen sertlikte poliakrilamid hidrojeller içeren kuyuları alın.
Hidrojel sertliğini algılamak için fokal adezyonlar veya FA'lar - hücre-ECM bağlanmasına aracılık eden kompleksler - oluşturan mikrovasküler endotel hücreleri ekleyin.
Daha sert hidrojeller, daha yumuşak hidrojellere kıyasla bir hücre iskeleti bileşeni olan vimentinin hücre yüzeyi ekspresyonunu yükseltir.
Aktin montajını indükleyen protein veya ActA için promotör altında bir floresan proteini eksprese etmek üzere tasarlanmış Listeria monocytogenes bakterilerini ekleyin.
Bakteri temasını konakçı hücrelerle senkronize etmek için santrifüjleyin ve inkübe edin.
Bakteriler vimentine bağlanır. Daha sert hidrojele bağlı konakçı hücreler üzerinde daha fazla vimentin, daha fazla bakteri uyumuna ve endositoza yol açar.
İçselleştirilmemiş bakterileri ortadan kaldıran bir antibiyotik ekleyin.
İçselleştirilmiş bakteriler toksinler salgılayarak endozom zarını yırtar. Sitoplazmik kaçış, hücre içi bakterileri etiketleyerek floresan proteini eksprese etmek için ActA promotörünü aktive eder.
Hücreleri enzimatik olarak ayırın. Akış sitometrisi kullanarak,
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin