JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:24 dk. • July 8th, 2025
Değişen sertlikteki kollajen kaplı poliakrilamid hidrojeller üzerinde yapışık insan endotel hücresi tek katmanlarına sahip çok kuyulu bir plaka alın.
Daha sert hidrojeller üzerindeki hücreler, daha yumuşak hidrojellere kıyasla hücre içi gerilimi artırarak önemli hücre iskeleti yeniden yapılanmasına uğrar.
Hücreleri ortamla yıkayın ve aktin montajını indükleyen protein (ActA) promotörü altında bir floresan proteini eksprese eden mühendislik Listeria monocytogenes ekleyin.
Hücre-bakteri temasını kolaylaştırmak için santrifüjleyin. Bakteriyel endositoza aracılık etmek için inkübe edin.
Medya ile yıkayın. İçselleştirilmemiş bakterileri ortadan kaldırmak için gentamisin ile tedavi edin. Kuluçkaya yatmak.
İçselleştirilmiş bakteriler gözenek oluşturan toksinler salarak fagozomal zarları bozar. Sitozolik bakteriler, hücre içi bakterileri etiketleyerek ActA ve floresan protein ekspresyonunu yukarı regüle eder.
ActA proteinleri, aktin polimerizasyonunu indükler, bakterileri ileri iten bir aktin kuyruklu yıldız kuyruğu oluşturur, komşu hücreler tarafından içselleştirmeye neden olur ve yayılmayı teşvik eder.
İnkübasyon sonrası, hücre çekirdeklerini boyamak için boya içeren ortamlar kullanın. O
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin