Lenfoma hücresinin bir test ilacına duyarlılığında nötrofil benzeri hücrelerin rolünün belirlenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:23 dk. • July 8th, 2025
Bir bazal membran matrisinde lenfoma hücrelerinin 3D sferoid monokültürlerini, kanserli beyaz kan hücrelerini ve lenfoma ve nötrofil benzeri hücrelerin ko-kültürlerini içeren çok kuyulu bir plaka alın.
Hücre içi tübüline bağlanan ve mikrotübül polimerizasyonunu bozan ve hücresel apoptozla sonuçlanan bir test ilacı ekleyin.
Ko-kültürde, doğrudan lenfoma hücresi teması, nötrofil benzeri hücreleri aktive ederek sitokin sekresyonunu indükler.
Bu sitokinler, lenfoma hücre reseptörleri ile etkileşime girerek aşağı akış sinyal kaskadlarını tetikler ve anti-apoptotik protein ekspresyonunu yukarı regüle ederek hücre sağkalımını destekler.
Medyayı atın. Hücresel yapışmayı bozmak için bir ayrışma tamponu ekleyin.
Sferoidleri kazıyın ve çalkalama altında inkübe edin. Süspansiyonu tüplere aktarın ve tek hücreli süspansiyonlar oluşturmak için çalkalamaya devam edin.
Lenfoma ve nötrofil benzeri hücreleri etiketleyen florofor konjuge bir antikor kokteyli tanıtın.
Apoptotik ve ölü hücreleri etiketlemek için florofor etiketli annexin V ve propidyum iyodür ekleyin.
Akış sitometrisi kullanarak, ko-kültürde artmış lenfoma hücresi sağkalımını tespit edin, bu da ilaca karşı nötrofil aracılı korumayı göst
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin