Tedaviye Bağlı Yaşlanan Kanser Hücrelerinin Akış Sitometrisine Dayalı Miktar Tayini

Hücrelerin bir yüzdesinde yaşlanmaya neden olan bir kemoterapi ilacı ile önceden tedavi edilmiş kanser hücrelerini alın.

Bu hücreler, bilinen bir yaşlanma belirteci olan otofloresan lipofusin granüllerini biriktirir.

Hücrelere giren ve lizozomal proton pompalarını inhibe eden, lizozomal asitleşmeyi önleyen bir antibiyotik ekleyin.

PH'daki bir artış lizozomal enzimleri inaktive eder.

Yaşlanan hücreler, nötre yakın pH'ta bile lizozomal β-galaktosidazı aşırı eksprese eder ve bu da onu bir yaşlanma biyobelirteç yapar.

Bir β-galaktosidaz substratı tanıtın. Kuluçkaya yatmak.

β-galaktosidaz, içselleştirilmiş substratı bir floresan ürüne hidrolize eder ve yaşlanan hücreleri etiketler.

Süpernatanı santrifüjleyin ve atın.

Bir hücre canlılığı boyası ekleyin. Canlı hücreler içinde, aktif esterazlar boyayı zar geçirimsiz bir floresan ürüne dönüştürür. Zar bütünlüğü bozulmuş ölü hücreler lekelenmeden kalır.

Akış sitometrisini kullanarak, yaşlanan hücreleri gösteren ikili belirteçler lipofuscin ve floresan β-galaktosidaz substratını gösteren canlı hücreleri tespit edin.

İlaç etkinliğini göstermek için yaşlanan hücrelerin yüzdesini ölçün.

İlk olarak, kültürlenmiş hücre örneklerinin lizozomal pH'ın