EPS Matris Tespiti ile Safra Tuzu ile İndüklenen Biyofilm Oluşumunu İncelemek İçin Bir Test

Bir büyüme ortamında patojenik enterik bakteriler içeren çok kuyulu bir plaka alın.

Seçilen kuyucuklardaki ortam, sert büyüme koşullarını taklit eden safra tuzları veya deterjan benzeri aktiviteye sahip amfipatik moleküller içerir.

Safra tuzları bakteri zarını bozar ve DNA ve proteinlere zarar verir.

Bir karşı mekanizma olarak, bakteriler bir biyofilm oluşturur - polisakkaritler, proteinler, lipitler ve mikrobiyal kökenli nükleik asitler içeren, kendi kendine üretilen hücre dışı polimerik maddeler veya EPS matrisi ile kaplanmış yapılandırılmış bir bakteri topluluğu.

EPS tabakası, bakterileri safra tuzlarına maruz kalmaktan korur.

Kuluçka sonrası, serbest yüzen bakterileri uzaklaştırmak için ortamı aspire edin.

Biyofilmin mimarisini korumak için bir sabitleme tamponu ile muamele edin ve fazla tamponu çıkarmak için yıkayın.

EPS polisakkaritlerine bağlanan ve biyofilmi etiketleyen bir lektin olan floresan etiketli Concanavalin A'yı ekleyin. Fazla Concanavalin A'yı çıkarmak için yıkayın.

Bir plaka okuyucu kullanarak floresansı ölçün. Safra tuzu içeren kuyucuklarda daha yüksek bir floresan yoğunluğu, safra tuzunun neden olduğu biyofilm oluşumunu gösterir.

EPS'nin yarı kantitatif tespiti