Mantar Hifleri Üzerinde Biyofilm Oluşturan Bakterileri Görselleştirmek için Numune Hazırlama Yöntemi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:37 dk. • July 8th, 2025
Selofan bağlı bir mantar kolonisini floresan etiketli bir bakteri süspansiyonuna sokun. Selofanı çıkarın ve inkübe edin.
Bakteri hücreleri, yüzey molekülleri ve reseptörleri aracılığıyla mantar yüzeyine yapışır. Yapışan bakteriler, polisakkaritler, proteinler ve DNA'dan oluşan hücre dışı polimerik maddeler salgılar, bakteri hücrelerini yakalar ve biyofilmin yapısal temelini oluşturur.
Gevşek bir şekilde bağlanmış bakterileri çıkarmak için bölümü güçlü bir tuz solüsyonunda durulayın
Bir fosfat tamponunda, koloninin bir bölümünü kesin.
Bölümü, buğday tohumu aglütinini veya kırmızı floresan boyaya bağlı WGA içeren steril suya aktarın.
Bir bitki proteini olan WGA, N-asetilglukozamin ve sialik asit kalıntılarına bağlanarak, eklenen boyanın mantar hücre duvarı üzerinde floresan olmasını sağlar.
Bölümü bir fosfat tamponunda durulayın.
Bir slaytı kısmen arabelleğe daldırın. Bölümün üzerinde yüzmesine izin verin. Biyofilm bozulması olmadan bölümün oturması için nazikçe kaldırın.
Bir montaj ortamı yerleştirin, ardından mikroskobik analiz için bir lamel yerleştirin.
Bakterileri gece boyunca büyüttükten sonra, kültürü üç dakika boyunca 5.000 kez g'de santrifüjleyin ve ardından peleti 25 milili
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin