Konfokal Mikroskopi Kullanılarak Farklı Tümör Bölgelerinde Yerleşik T Hücresi Migrasyonunun Gerçek Zamanlı Analizi

Yerleşik T hücreleri içeren bir akciğer tümörü dilimi ile başlayın.

T hücreleri, tümör mikroçevresinden göç eder ve tümör hücreleri ve stromal elementlerle etkileşime girerek bağışıklık fonksiyonlarını yerine getirir.

Tümör mikroçevresinin bileşimi, T hücresi yer değiştirmesini ve hızını güçlü bir şekilde etkiler.

Mikro ortamdaki T hücrelerini, tümör hücrelerini ve stromal elementleri etiketlemek için farklı floresan bağlanmış antikorlar ekleyin.

Çekirdeği boyamak için hasarlı bir plazma zarı olan hücrelere sızan ve tümör içindeki nekrotik bölgelerin görselleştirilmesini sağlayan DAPI'yi ekleyin.

Lekeli numuneyi konfokal mikroskop altında gözlemleyin.

Uygun bir floresan ışığı kullanarak, yerleşik T hücrelerini içeren bir tümör bölgesi seçin. DAPI pozitif hücreleri değerlendirerek hücre canlılığını değerlendirin.

Gerçek zamanlı analiz için zaman aralıklarını ve toplam kayıt süresini tanımlayın.

Z yığını görüntülerini yakalamak için, etiketli T hücrelerinin altındaki bir derinlikten başlayın ve görüntüleri çeşitli zaman aralıklarında yakalayın.

Farklı tümör bölgelerindeki T hücresi yer değiştirme uzunluğunu ve ortalama hızı karşılaştırmak için izleme yazılımını kullanın.

Gerekli flor