JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:11 dk. • July 8th, 2025
Mikrotübül bağlayıcı protein tau'nun tekrar alanını ifade eden bir memeli hücre kültürünü ele alalım.
Bu sitoplazmik tau raportörleri, agregasyona eğilimli bir mutasyona sahiptir ve monomerler olarak bulunur.
Raportörler, florofor A veya B'ye kaynaştırılır ve birincisinin emisyon spektrumu, ikincisinin absorpsiyon spektrumu ile örtüşür.
Tau tohumları veya tam uzunlukta tau'nun fibriler agregaları ile komplekslenmiş bir lipozom ekleyin.
Hücreye girdikten sonra, lipozom sitoplazmadaki tohumları serbest bırakır.
Serbest bırakılan tohumlar, tau muhabirlerinin toplanmasına aracılık eder ve florofor A'yı florofor B'nin yanına getirir.
Hücreleri ayırmak için tripsin ekleyin, ardından fiksasyon yapın.
Bir akış sitometresi kullanarak hücreleri analiz edin.
Agrega içindeki yakınlık nedeniyle, uyarma üzerine, bir dipol-dipol etkileşimi yoluyla florofor A'dan B'ye enerji transferi, floresan rezonans enerji transferi veya FRET olarak adlandırılır.
Uyarılmış florofor B, varlığı protein agregasyonunu gösteren bir FRET sinyali yayar.
Biyosensör hücrelerini steril koşullar altında yeniden plakalamak için, her hücre hattını ılık PBS ile durulayın ve ardından Tripsin-EDTA ile 3 dakikalık bir inkübasy
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin