JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:22 dk. • July 8th, 2025
Ağır zincirli ve hafif zincirli antikor genleri için ayrı vektörler içeren bir tüp ile başlayın.
Vektörlerle kompleksler oluşturmak için bir transfeksiyon reaktifi ekleyin.
Bu karışımı memeli konakçı hücrelere aktarın ve içselleştirme için kuluçkaya yatırın.
Transfekte edilmiş hücrelerin eşit dağılımını teşvik etmek, hücre iyileşmesini ve büyümesini iyileştirmek için topaklanma önleyici bir ajan ekleyin.
Kontaminasyonu önlemek için anti-bakteriyel-anti-mikotik bir çözelti ekleyin.
Konak hücre içinde, vektörler konak genomuna entegre olur.
Gen transkripsiyonunu takiben, bireysel mRNA'lar çekirdekten çıkar ve yeni ortaya çıkan antikor zincirleri oluşturmak için translasyona uğrar.
Yeni ortaya çıkan zincirlerin uygun şekilde katlanması ve değiştirilmesi, ağır ve hafif zincirler verir.
Bu zincirler, daha sonra hücre dışı ortama salınan tamamen işlevsel antikorlar oluşturmak için birleşir.
Ortamı ve santrifüjü hasat edin. Süpernatanı filtreleyin.
Filtratı, antikorların seçici bağlanmasına izin veren bir saflaştırma kolonundan geçirin.
Bir elüsyon tamponu kullanarak, saflaştırılmış antikorları elüte edin.
CHO hücrelerini 200 mililitre ortamda uzun Erlenmeyer şaşkın şişelere büyütün. 15 m
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin