FA aracılı efektör fonksiyonlarının aktivasyonunun HA antikorları tarafından ölçülmesi

İnfluenza virüsü hemaglutininini veya HA'yı, küresel bir kafa ve bir saptan oluşan bir glikoproteini hedef alan bir antikorun seri dilüsyonlarını alın.

Seyreltmeleri, yüzeye bağlı HA'yı ifade eden transfekte edilmiş memeli hücrelerine ekleyin. Antikorlar, HA sap bölgelerine bağlanarak bağışıklık kompleksleri oluşturur.

Fc reseptörlerini eksprese eden ve transkripsiyon faktörü NFAT'ın kontrolü altında bir lusiferaz raportörünü kodlayan mühendislik T hücrelerini tanıtın.

İnkübasyon sırasında, HA'ya bağlı antikor Fc reseptörüne bağlanırken, HA kafası sialik aside bağlanarak T hücresi aktivasyonunu tetikler ve sitozolik kalsiyum konsantrasyonunu arttırır.

Bu aktivasyon, NFAT'ın fosforilasyonunun giderilmesiyle sonuçlanan ve nükleer translokasyonunu tetikleyen bir sinyal kaskadını başlatır.

NFAT, genomdaki yanıt elemanlarına bağlanarak lusiferaz ekspresyonunu yönlendirir.

Hücre geçirgen bir biyolüminesan substrat ekleyin. Lusiferaz, substratı oksitleyerek bir sinyal üretir.

Azalan antikor konsantrasyonu ile azalan lüminesans, HA sapına özgü antikor aracılı T hücresi aktivasyonunu doğrular.

İlgilenilen spesifik antikorların hemaglutinin eksprese eden hücreleri hedefleme yeteneğini değerl