JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:51 dk. • July 8th, 2025
Bir metallopeptidaz ile aşılanmış bir fareyi ele alalım. Dalağı hasat edin ve bir hücre süspansiyonu elde edin.
Süspansiyonu bir ağ ve santrifüjden süzün, doku kalıntılarını giderin.
İzole edilen hücreler, metallopeptidaz epitoplarına karşı antikorlar üreten metallopeptidaza özgü B hücrelerini içerir.
Nükleotid sentezi için nükleobazların kurtarılmasını önleyen HGPRT enziminden yoksun ölümsüz miyelom hücreleri ekleyin. De novo nükleotid sentezi yoluyla hayatta kalırlar.
Bir pelet elde etmek için santrifüjleyin ve süpernatanı atın.
PEG ekleyin ve inkübe edin, HGPRT pozitif ölümsüz hibridomlar oluşturmak için miyelom-B hücre füzyonunu indükleyin.
Hipoksantin, aminopterin ve timidin içeren HAT ortamı ekleyin. Hibridoma büyümesini teşvik eden bir peritoneal makrofaj besleyici tabakası içeren kuyucuklara aktarın.
Aminopterin, de novo nükleotid sentezini bloke ederek kaynaşmamış miyelom hücrelerinin ölmesine neden olur. Kaynaşmamış B hücreleri, kısa ömürleri nedeniyle ölür.
HGPRT pozitif hibridomalar, nükleotid öncüleri hipoksantin ve timidini kurtarır, çoğaltır ve metallopeptidaza özgü monoklonal antikorlar salgılar.
Aşağı akış tahlilleri yoluyla antikor üretimini doğrulamak için süpern
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin